[发明专利]一种A群链球菌寡糖蛋白缀合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种A群链球菌寡糖蛋白缀合物及其制备方法与应用。该A群链球菌寡糖蛋白缀合物中，其寡糖抗原是明确且单一的寡聚体六糖或九糖衍生物，可通过化学方法合成；其连接臂为丁二酰亚胺；其使用的新型载体蛋白ScpA193为定向突变失活的A群链球菌毒力因子C5a肽酶。本发明还涉及上述A群链球菌寡糖蛋白缀合物的制备方法及其在制备抗A群链球菌疫苗中的应用。本发明所述的A群链球菌寡糖蛋白缀合物可以同时诱导出两类不同靶点的抗体协同针对A群链球菌，是一种复合型疫苗。这种疫苗具有更好的适用性，可以更有效的抑制A群链球菌，并且不受限于抗生素大量使用带来的细菌耐药性问题。

技术领域

本发明涉及一种A群链球菌寡糖蛋白缀合物及其制备方法与应用，属于抗A群链球菌疫苗研制技术领域。

背景技术

A群链球菌(GAS)是一种常见的革兰氏阳性病原菌，据统计，全球每年死于GAS感染疾病的人数约50万，其中80％是由GAS感染并发症引起的，主要以风湿性心脏病和侵略性GAS疾病为主(The Lancet Infectious Diseases 2005,5(11),685-694)。对于GAS感染引起的疾病，常见的治疗方式是使用抗生素干预，但随着细菌抗药性的不断增强，抗A群链球菌疫苗的研制对于GAS感染疾病的预防和治疗显得尤为重要。

理想的抗A群链球菌疫苗应具备以下特点：(1)其抗原决定簇是保守性的，存在于所有的A群链球菌菌株中；(2)其具有高的免疫原性；(3)其可以很好的使人体产生强有力的免疫记忆，比如诱导血清免疫蛋白G(IgG)和粘膜免疫蛋白A(IgA)响应，同时又不会与人体组织发生交叉免疫反应(Journal of Molecular Medicine 2012,90(10),1197–1207)。A群链球菌细胞壁表面多糖和其毒力因子C5a肽酶(ScpA)都是潜在的疫苗抗原靶标分子。由于细菌细胞表面多糖本身的免疫原性较低，以其为抗原开发疫苗的方式通常是将获得的糖链经过修饰后与具有免疫增强活性的载体蛋白共价结合来制备相应的糖蛋白缀合物。

加拿大Pinto等人合成了包含二到六个糖基的寡糖抗原(Carbohydrate research1996,291,21-41)，与鸡卵清蛋白和牛血清蛋白共价缀合来制备相应寡糖缀合物(Bioorganic&Medicinal Chemistry 1996,4(11),2003-2010)，并研究了寡糖缀合物的免疫活性与寡糖半抗原结构间关系(Carbohydrate Research 2000,324(1),17-29)；诺华公司制备了六糖、十二糖寡糖半抗原并与破伤风类毒素共价缀合来制备寡糖缀合物(WO2012082635)，此寡糖缀合物在老鼠免疫实验中展现出良好的免疫活性(Vaccine 2010,29,104-114)。但是，上述研究工作使用的载体蛋白为常见的载体蛋白，比如鸡卵清蛋白、牛血清蛋白、破伤风类毒素等。目前已有研究报道使用上述载体蛋白制备的糖缀合物在免疫时可能产生一些不良效果，主要体现在抗原竞争和载体诱导抗原表位抑制两个方面(HumanVaccines&Immunotherapeutics 2013,9(12),2505-2523)。

当前，抗A群链球菌糖缀合物疫苗的研究仍然停留在试验阶段，有许多问题函待解决。目前，以ScpA193为载体与GAS寡糖抗原连接制备抗A群链球菌寡糖缀合物疫苗，尚未见相关文献报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种A群链球菌寡糖蛋白缀合物及其制备方法与应用，以失活的A群链球菌C5a肽酶ScpA193为载体，与A群链球菌寡糖抗原连接制备抗A群链球菌的寡糖蛋白缀合物，其中的寡糖抗原是A群链球菌细胞壁表面多糖的寡聚衍生物。

术语说明：

室温：是指25±2℃。

本发明通过如下的技术方案来实现：

一种A群链球菌寡糖蛋白缀合物，结构通式如式(I)所示：