[发明专利]一种胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒，由如下组分组成：双抗体磁性微球、PGⅠ/Ⅱ校准品、双抗体标记物、分析缓冲液、清洗液、增强液和RFID卡。本方法基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合，即克服酶标板物理性吸附反应时间较长，检测结果较慢的弊端，大大缩短反应时间，同时也具备时间分辨检测技术准确性高、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、检测稳定且方便的优点。本发明对于传统的两步法检测作了进一步优化，检测只需一步法检测，20分钟内即可检出结果。并且进一步地，使用时间分辨双标记优势，实现PGⅠ/Ⅱ的二联检，更进一步缩短项目结果检出时间。

技术领域

本发明涉及一种胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒及其制备方法，具体涉及一种基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒的制备方法。

背景技术

胃蛋白酶原是胃液中胃蛋白酶的非活性前体，免疫学上可分为两型：胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)和胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)，PGⅠ主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌，而PGⅡ除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段分泌。胃底腺粘膜萎缩的过程中，分泌PGⅠ的主细胞减少，幽门腺细胞增多，从而造成PGⅠ/PGⅡ比率降低，通过胃蛋白酶原的检测，特别是PGⅠ/PGⅡ比值和PGⅠ水平，对于诊断慢性萎缩性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎和肠化生有很高的价值。

1份血清样本同时检出胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ两个项目；时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)的多标记优势，使用两种镧系元素分别标记胃蛋白酶原Ⅰ抗体、胃蛋白酶原Ⅱ抗体的混合标记物，两种分别包被有胃蛋白酶原Ⅰ抗体、胃蛋白酶原Ⅱ抗体的磁性微球混合液，再与血清样本中两种对应的抗体结合即可形成双标记的双抗体夹心法。既继承了时间分辨免疫荧光分析法的高敏、宽线性、高精密性的优点，同时也具有磁性微球溶液的液相特性，再结合双标记，进一步缩短反应时间，更快的检出结果。相比化学发光(CLIA)、电化学发光(ECL)检测方法，达到同性能检测的同时，也具有低成本的优势。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服现有技术的相应缺陷，提供一种更快、更便捷的胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ二联检试剂盒，由如下组分组成：双抗体磁性微球、PGⅠ/Ⅱ校准品、双抗体标记物、分析缓冲液、浓缩洗液(清洗液)和增强液、RFID卡。

优选地，所述的磁性微球是将微米级的Fe₂O₃或Fe₃O₄磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性的、能够与免疫性抗原或抗体相结合的微米级的微球，即通称为“磁珠”。磁性微球应能满足直径为0.1～5μm，磁性微球通过表面修饰可带有多种活性功能基团，包括但不限于羟基(-OH)、氨基(-NH₂)、羧基(-COOH)。

优选地，所述的双抗体磁性微球是采用以下步骤制备而成的：

将PGⅠ、PGⅡ抗体分别经2～8℃超速冷冻离心机将缓冲体系置换处理后，与清洗、活化后的磁性微球混合并恒温孵育，孵育后清洗磁珠丢弃上清液，然后用磁珠封闭液进行封闭，清洗磁珠再次丢弃上清液，将两种高浓度抗体磁性微球于磁珠保存液中2～8℃冰箱直立保存，再将两种磁珠稀释至工作浓度后混合即制成双抗体磁性微球。

所述磁性微球的活化中EDC及Sulfo-NHS每毫克磁性微球优选地加样质量为10μg～1000μg。活化方式包括但不限于EDC、Sulfo-NHS其中的一种和两种。

优选地，所述的双抗体标记物中的抗体与镧系元素是通过中间螯合剂完成，镧系元素包括但不限于铕(EU)、钐(SM),螯合剂包括但不限于异硫氰酸苯基-EDTA、异硫氰酸苯甲基-DTTA、P-异硫氰基苄基-DTTA、二乙烯三胺五醋酸氨基苯基-EDTA。