[发明专利]一种检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒及其制备方法，由如下组分组成：包被有PGⅠ抗体的磁性微球、PGⅠ校准品、与镧系元素结合的PGⅠ抗体标记物、分析缓冲液、清洗液、增强液和RFID卡。本方法基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合，即克服酶标板物理性吸附反应时间较长，检测结果较慢的弊端，大大缩短反应时间，同时也具备时间分辨检测技术准确性高、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、检测稳定且方便的优点。磁性微球包被相应的抗原或抗体，因磁性微球立体的特性，大大增加免疫反应的接触表面积，从而大大缩短检测时间，并且本发明对于传统的两步法检测作了进一步优化，检测胃蛋白酶原Ⅰ只需一步法检测，20分钟内即可检出结果。

技术领域

本发明涉及一种检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒及其制备方法，具体涉及一种基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒的制备方法。

背景技术

胃蛋白酶原是胃液中胃蛋白酶的非活性前体，免疫学上可分为两型：胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)和胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)，PGⅠ主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌，而PGⅡ除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段分泌。胃底腺粘膜萎缩的过程中，分泌PGⅠ的主细胞减少，幽门腺细胞增多，从而造成PGⅠ/PGⅡ比率降低，通过胃蛋白酶原的检测，特别是PGⅠ/PGⅡ比值和PGⅠ水平，对于诊断慢性萎缩性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎和肠化生有很高的价值。

目前胃蛋白酶原Ⅰ血清学检测方法有酶联免疫(ELISA)、胶体金法、化学发光(CLIA)、电化学发光(ECL)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)等。ELISA作为半定量检测方法是现应用最广的检测方法，但其灵敏度、线性宽度范围均未达到较高水平，难以适应市场发展的需求。胶体金法与ELISA均有相同的缺点。而CLIA及ECL虽灵敏度高但均存在检测设备造价高昂，而相应的标记物研发门槛高，短时期内国内均会受制于人，同样也限制了在国内的推广。而时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)灵敏度能达到CLIA一致的水平，不仅检测设备造价较低，并且标记技术在国内已相当成熟、检测成本低兼。而传统的时间分辨检测，仍以空白酶标板的物理吸附为主，检测过程耗时长。缩短反应时间，降低检测成本，提高检测灵敏度及线性范围，将具有不错的市场前景。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服现有技术上及相关技术检测费用高昂的缺点，提供一种检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种检测胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒，由如下组分组成：包被有PGⅠ抗体的磁性微球、PGⅠ校准品、与镧系元素结合的PGⅠ抗体标记物、分析缓冲液、浓缩洗液(清洗液)和增强液、RFID卡。

优选地，所述的包被有PGⅠ抗体的磁性微球是将微米级的Fe₂O₃或Fe₃O₄磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性的、能够与免疫性抗原或抗体相结合的微米级的微球，即通称为“磁珠”。磁性微球应能满足直径为0.1～5μm，磁性微球通过表面修饰可带有多种活性功能基团，包括但不限于羟基(-OH)、氨基(-NH₂)、羧基(-COOH)。

优选地，所述的包被有PGⅠ抗体的磁性微球是采用以下步骤制备而成的：

将PGⅠ抗体经2～8℃超速冷冻离心机将缓冲体系置换处理后，与清洗、活化后的磁性微球混合并恒温孵育，孵育后清洗磁珠丢弃上清液，然后用磁珠封闭液进行封闭，清洗磁珠再次丢弃上清液，将包被有PGⅠ抗体的磁性微球在磁珠保存液中2～8℃冰箱中直立保存。

所述磁性微球的活化中EDC及Sulfo-NHS每毫克磁性微球优选地加样质量为10μg～1000μg。活化方式包括但不限于EDC、Sulfo-NHS其中的一种和两种。