[发明专利]一种检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒及其制备方法，由如下组分组成：包被有抗‑HBe的磁性微球、抗‑HBe校准品、中和抗原、与镧系元素结合的抗‑HBe标记物、分析缓冲液、清洗液、增强液和RFID卡。本方法基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合，即克服酶标板物理性吸附反应时间较长，检测结果较慢的弊端，大大缩短反应时间，同时也具备时间分辨检测技术准确性高、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、检测稳定且方便的优点。磁性微球包被相应的抗原或抗体，因磁性微球立体的特性，大大增加免疫反应的接触表面积，从而大大缩短检测时间，检测抗‑HBe只需35分钟即可检出结果。

技术领域

本发明涉及一种检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒及其制备方法，具体涉及一种基于磁性微球与时间分辨免疫分析法相结合检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒的制备方法。

背景技术

乙型肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的能导致肝性炎症及肝功能损害的一种传染性疾病。乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）是HBV感染的标志，常出现于乙型肝炎病毒表面抗原或乙型肝炎病毒表面抗体阳性的血中。据报道抗-HBe的检出一般见于乙型肝炎的恢复期，较乙型肝炎表面抗体出现略早，可在黄疸出现后4至7周检出，是一个预后良好征象。

目前乙肝病毒血清学检查项目一般包括HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc，即俗称的“乙肝两对半”。现主流抗-HBe的检测方法有酶联免疫（ELISA）、胶体金法、化学发光（CLIA）、电化学发光（ECL）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）等。ELISA作为半定量检测方法是现应用最广的检测方法，但其灵敏度、线性宽度范围均未达到较高水平，难以适应市场发展的需求。胶体金法与ELISA均有相同的缺点。而CLIA及ECL虽灵敏度高但均存在检测设备造价高昂，而相应的标记物研发门槛高，短时期内国内均会受制于人，同样也限制了在国内的推广。而时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）灵敏度能达到CLIA一致的水平，不仅检测设备造价低廉，并且标记技术在国内已相当成熟、检测成本低兼。而传统的时间分辨检测，仍以空白酶标板的物理吸附为主，检测过程耗时长。缩短反应时间，降低检测成本，提高检测灵敏度及线性范围，将具有不错的市场前景。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服现有技术上的缺陷及相关技术检测费用高昂的缺点，提供一种检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒，及所述试剂盒的制备方法。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种检测乙型肝炎病毒e抗体试剂盒，由如下组分组成：包被有抗-HBe的磁性微球、抗-HBe校准品、中和抗原、与镧系元素结合的抗-HBe标记物、分析缓冲液、浓缩洗液（清洗液）和增强液、RFID卡。

优选地，所述的包被有抗-HBe的磁性微球中的磁性微球是将微米级的Fe₂O₃或Fe₃O₄磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性的、能够与免疫性抗原或抗体相结合的微米级的微球，即通称为“磁珠”。磁性微球应能满足直径为0.1～5μm，磁性微球通过表面修饰可带有多种活性功能基团，包括但不限于羟基（-OH）、氨基（-NH₂）、羧基(-COOH)。

优选地，所述的包被有抗-HBe的磁性微球中的抗-HBe即可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。

优选地，所述的包被有抗-HBe的磁性微球是采用以下步骤制备而成的：

将抗-HBe经2～8℃超速冷冻离心机将缓冲体系置换处理后，与清洗、活化后的磁性微球混合并恒温孵育，孵育后清洗磁珠丢弃上清液，然后用磁珠封闭液进行封闭，清洗磁珠再次丢弃上清液，将包被好的抗-HBe在磁珠保存液中以2～8℃冰箱直立保存。