[发明专利]一种柯萨奇病毒减毒株及其应用

说明书

本发明提供了一种柯萨奇病毒减毒株及其应用，所述的柯萨奇病毒减毒株为柯萨奇病毒B组5型JZ‑P50株（Enterovirus coxsackie virus CVB5 JZ‑P50），保藏编号为CCTCC No：V201858。本发明利用减毒活疫苗的方式，对柯萨奇病毒B5毒株进行减毒，所用细胞为Vero细胞，通过低温连续培养50代，意外地获得CVB5减毒疫苗，与野生病毒株相比，具有冷适应性和温度敏感性的优势特征，具有体内减毒特性、免疫原性和遗传安全性的性能改进，为降低生产成本，制备有效的、安全的、廉价的CVB5疫苗提供了保障。

技术领域

本发明涉及一种柯萨奇病毒减毒株及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

柯萨奇病毒B组5型(Coxsakievirus B5，CVB5)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)，肠道病毒属(Enterovirus)是一种常见的人类肠道病毒，感染后轻则可引起婴幼儿上呼吸道感染、腹泻及手足口病，重则能引起18岁以下人群病毒性脑膜炎，无菌性脑膜炎、胰腺炎、扩张性心肌病等多种疾病。CVB5在全世界范围内广泛流行，但对于引起的重症疾病目前并没有有效的治疗手段，更没有可预防的CVB5疫苗的报道。

当前研究疫苗的方法有很多，比如，亚单位疫苗，活载体疫苗、核酸疫苗等，这些疫苗已不是完整的病原体，而是相关的蛋白(多肽、肽)、多糖和核酸，经过载体免疫接种后，诱导机体产生特异性的体液或细胞免疫反应，但是也会存在免疫原性较弱，无法达到保护效果，甚至会导致疾病的加重。

传统的疫苗方法就显得安全有效很多。传统疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗。

灭活疫苗是用物理、化学方法杀死病原微生物，但仍保持其免疫原性的一种疫苗，优点是没有毒力，安全性好，相对稳定，4℃可保存一年以上，缺点抗原用量多且接种次数多，只引起体液免疫，免疫维持时间短，在体内不增殖。减毒活疫苗通过毒力变异或人工选择法(温度敏感株)而获得减毒或无毒株，但仍保留其繁殖能力和免疫原性的一种疫苗，优点是抗原用量少接种一次即可，可诱发体液免疫和细胞免疫的双重功效，免疫维持时间较长，缺点有毒力返祖的危险，相对不稳定，不易保存。

制备减毒活疫苗的方法也有多种，体内外传代减毒、低温培养筛选、诱变减毒等。目前我国已成功研制出的疫苗，脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、水痘疫苗、甲型肝炎疫苗和乙型脑炎疫苗都属于减毒活疫苗。

现有技术中存在的技术问题是：缺少一种免疫原性和安全性都符合要求的柯萨奇病毒B组5型减毒活疫苗。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种柯萨奇病毒减毒株及其应用。

本发明的目的是筛选出一株柯萨奇病毒B组5型JZ-P50株(Enteroviruscoxsackie virus CVB5JZ-P50)，使其毒力降低且不丧失免疫原性。CVB5毒株是从云南省第一人民医院手足口病患儿的粪便中获得，通过连续低温传代而获得温度敏感株，命名为JZ-P50，该减毒株已于2018年10月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址中国武汉，武汉大学)，保藏号为CCTCC NO：V201858；本发明的CVB5温度敏感株JZ-P50免疫动物后证明具有安全性和免疫原性，认为可作为减毒活疫苗的毒种。

本发明涉及到的微生物的保藏信息如下：

保藏日期：2018.10.23

保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；

保藏编号：CCTCC No：V201858；

分类命名：柯萨奇病毒B组5型JZ-P50株(Enterovirus coxsackie virus CVB5JZ-P50)。

特征：与野生病毒株相比，具有冷适应性和温度敏感性的特征优势，具有体内减毒特性、免疫原性和遗传安全性的性能。