[发明专利]一种鉴别高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤的试剂盒

说明书

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种肿瘤诊断试剂,所述肿瘤诊断试剂能够检测样本中miR‑376b‑5p的表达情况,miR‑376b‑5p序列为cgtggat attccttcta tgttt。本发明通过miSeq高通量测序技术筛选到miR‑376b‑5p在颅内淋巴瘤患者﹑高级别胶质瘤患者和正常对照血清外泌体中有差异。采用RT‑PCR检测miR‑376b‑5p的表达，评估其在高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤的诊断效能。首次发现了miR‑376b‑5p在作为颅内淋巴瘤、高级别胶质瘤诊断制剂、诊断试剂盒的应用，对潜在的治疗药物等方面的应用也具有重要的参考价值。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及血清外泌体中的miRNA在肿瘤诊断中的应用，具体涉及miR-376b-5p在制备高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断制剂中的应用。

背景技术

高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤是人类常见的颅内恶性肿瘤之一。具有高度增殖性和侵袭性，有难治性、易局部播散和易复发等特点，预后极差，生存期短。制定合理的治疗方案延长患者的生存期，离不开准确的诊断。目前颅内肿瘤的诊断的“金标准”是组织学病理活检,然而大部分胶质瘤位于颅内重要部位，且位置深在，而且病理活检手术创伤大，患者及家属常难以接受,因此很难获得病理标本用于诊断。初诊主要依靠影像学手段，而影像学诊断效能较低，不易早期发现。寻找高灵敏度的生物学标志物用于颅内肿瘤的术前诊断刻不容缓。

microRNA (miRNA)是真核生物体内表达的内源性非编码小分子RNA，近年来，许多疾病中己经发现了miRNA的异常表达，在恶性肿瘤中也有，且根据肿瘤类型的不同，miRNA的异常表达谱也不同。

外泌体(exosomes)是细胞分泌的有双层脂质膜的囊泡，是细胞之间生命活动物质交换的一种重要工具，可通过改变基因调控网络或表观遗传重组来调控生理病理过程。外泌体具有如下特点：（1）特异性：在不同生理或病理条件下，释放到胞外的外泌体的内含物也有所不同。在病理生理状态下细胞应是选择性将miRNA装载入外泌体中，细胞中表达水平低的miRNA，在外泌体中却有很高的表达量。（2）稳定性：由于有双层脂质膜的保护，酶不易消化外泌体的内含物，室温和冻融对外泌体中miRNA的影响甚微。（3）易获取性：现有技术能快速和准确地分离广泛分布于各种类型的体液中的外泌体。（4）易通过血脑屏障：外泌体粒径较小,体内渗透性强，极易透过血脑屏障，即使在一些血脑屏障保持完好的胶质瘤患者血液中，也能检测出胶质瘤细胞的外泌体。

因此，外周血外泌体中的miRNA可成为有效地神经系统肿瘤的标志物。基于高通量测序技术及生物信息学方法，可筛选血清外泌体中与肿瘤发生、发展相关循环核酸分子（主要为miRNA）及易感基因，建立miRNA差异表达谱，构建基因调控网络，寻找肿瘤诊断的循环核酸标志物。成熟的RT-PCR技术，可以实现核酸标志物的定量检测，验证评估后用于肿瘤的诊断和鉴别诊断。

发明内容

本发明针对传统高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断中存在的问题提出miR-376b-5p在高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断中的应用。

为了达到上述目的，本发明是采用下述的技术方案实现的：

肿瘤诊断试剂,所述肿瘤诊断试剂能够检测样本中miR-376b-5p的表达情况,miR-376b-5p序列为cgtggatattccttctatgttt。

作为优选，所述肿瘤为高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤。

作为优选，肿瘤诊断试剂采用高通量测序方法和/或定量PCR方法检测样本中miR-376b-5p的表达情况。

作为优选，所述高通量测序方法是指illumina公司推出的二代测序技术。

作为优选，所述用于定量PCR方法包括特异性扩增miR-376b-5p的引物。

作为优选，所述样本为外周血血清外泌体。