[发明专利]一种无血清成分的高效间充质干细胞培养液

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞培养液。本发明中的间充质干细胞培养液，包括以下成分：人血小板裂解液、青链霉素（Pen Strep）、长效谷氨酰胺、趋化因子XCL1、趋化因子CCL3、热休克蛋白(HSP70)、端粒酶抑制剂IFN‑α 2b、基础培养基DMEM。该干细胞培养液成分来源广泛，培养的间充质干细胞纯度高，增殖快，干性好，适合进行体外大规模培养以进行临床前研究和相关临床研究。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞培养液。

背景技术

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells）是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，源于发育早期的中胚层，主要存在于结缔组织和器官间质中，可以从骨髓、外周血、脂肪及皮肤等多种组织中获得。间充质干细胞属于非终末分化细胞，它既有间质细胞的特征，又有内皮细胞及上皮细胞的特征；作为一类多能干细胞，它在体外特定的诱导条件下，可以向骨、软骨、肌肉等方向增殖分化。目前研究表明间充质干细胞对系统性红斑狼疮、帕金森病、脊髓损伤等都有一定治疗效果。

近年来，对间充质干细胞的研究日益增多，研究成果也在逐步走向临床应用，其中间充质干细胞的体外扩增培养是临床研究及应用的前提。但是在通常条件下，间充质干细胞在长期培养中易发生老化和凋亡，这些问题限制了间充质干细胞的进一步发展，寻找适合间充质干细胞的体外大规模培养体系，成为深入研究和应用间充质干细胞的热点之一。

目前间充质干细胞的体外培养扩增体系主要是在基础培养基中添加一定浓度的胎牛血清或者生长因子，如专利20121021322.X中加入了B27和bFGF和EGF。这些生长因子的加入，可能导致体外扩增培养细胞的意外分化，使间充质干细胞失去干性。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种无血清成分的高效间充质干细胞培养液，该干细胞培养液成分来源广泛，培养的间充质干细胞纯度高，增殖快，干性好，适合进行体外大规模培养以进行临床前研究和相关临床研究。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种无血清成分的高效间充质干细胞培养液，包括以下成分： 10%人血小板裂解液、0.4%青链霉素（Pen Strep）、2mmol/L长效谷氨酰胺、15ng/ml趋化因子XCL1、25ng/ml趋化因子CCL3、18ng/ml热休克蛋白(HSP70)、26ng/ml端粒酶抑制剂 IFN-α 2b、基础培养基为DMEM。

所述的无血清成分的高效间充质干细胞培养液pH值为6.8~7.0，渗透压为310mOsm/kg。

所述的无血清成分的高效间充质干细胞培养液的制备方法，包括以下步骤。

1. 人血小板裂解液的制备。

（1）取2×10¹¹ L^-1的机采人血小板，加入250ml 离心瓶中，6000g 室温离心20min。

（2）去上清，加入生理盐水洗血小板，2000g室温离心10min后用15ml生理盐水悬起。

（3）置于-20℃冰箱中冷冻过夜，后置于室温下融化。

（4）如此进行三个循环，得血小板裂解液。

2. 间充质干细胞培养液的制备。

分别取100ml人血小板裂解液、4ml Pen Strep（青链霉素）、2mmol 长效谷氨酰胺、15ng/ml趋化因子XCL1、25ng/ml趋化因子CCL3、18ng/ml热休克蛋白（HSP70），26ng/ml端粒酶抑制剂IFN-α 2b混合，然后用基础培养基DMEM补至1L体积，调节pH值为6.8~7.0，渗透压为310 mOsm/kg，即得本发明间充质干细胞培养液。