[发明专利]基于SERS技术检测阿特拉津、毒死蜱、三唑酮的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于SERS技术检测阿特拉津、毒死蜱、三唑酮的方法和试剂盒。所述试剂盒用于检测阿特拉津、毒死蜱、三唑酮中的一种或多种，其包括固相载体以及标记探针；所述固相载体包被有阿特拉津、毒死蜱、三唑酮的分子印迹聚合物膜；所述标记探针为偶联有人工抗原以及标记分子的金属纳米粒子；所述人工抗原为阿特拉津、毒死蜱、三唑酮的人工抗原中的一种，且每种标记探针上的标记分子能够使得其彼此在使用SERS技术检测时得以被区分。本发明将分子印迹技术与拉曼信号放大探针技术联用，建立对三种农药同时检测的检测方法。

技术领域

本发明涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于SERS技术检测阿特拉津、毒死蜱、三唑酮的方法和试剂盒。

背景技术

表面增强拉曼光谱(SERS)技术作为一种新兴的光谱分析技术，由于其具有操作简单、检测速度快等优点，被广泛应用于药物分析、生物分析、环境污染物等领域的检测。近年来，SERS在农药残留的现场快速实时检测方面凸显出了很大的应用价值，已有很多关于SERS检测农药的相关研究报道，但这些检测方法很大程度取决于吸附分子与SERS基底之间的相互作用以及SERS活性基底的表面等离子共振效应。因此，SERS基底的灵敏度、稳定性和均一性等特性是影响农药定性定量检测结果的关键因素，然而目前SERS基底存在着信号稳定性差、重复性低等难以克服的技术瓶颈，导致SERS技术作为定量手段进行样品分析时结果的不准确和不客观，特别是对农产品复杂基质中信号特征较弱的部分农药检测来说更是一个巨大的挑战，单凭依靠开发新型SERS活性基底去提高农药弱特征峰的检测灵敏度仅仅是一个权宜之计，并不能满足提高其分析准确度。因此，研究和开发新的SERS检测分析体系将会是一个解决当前SERS技术困境的新突破。

目前，SERS检测分析体系主要是利用纳米活性基底增强作用对目标分子进行直接检测，这种方法除了重复性差、不能准确定量以外，还存在着非特异性吸附干扰大的问题。SERS免疫标记分析技术是近年来快速发展的一种SERS检测新方法，这种方法实现了生物分析技术、纳米技术与SERS检测技术三者的有机结合，其原理是基底上的固相抗体、标记抗体与抗原结合形成“固相抗体-待测抗原-标记抗体”夹心复合物，利用金、银等贵金属纳米粒子的增强作用建立基于免疫竞争的高灵敏检测技术。该方法中SERS的标记技术因信号探针分子包裹金纳米粒子可产生较强的SERS信号，且不存在距离影响SERS信号的问题，无需目标物具有拉曼光谱特征峰,能避免多种不同分子间的谱峰重叠，对农药多残留检测具有一定借鉴意义。但由于SERS在同一界面溶液体系进行小分子物质竞争法检测时非特异性吸附干扰很大，且对于小分子目标物如采用抗原夹心法存在着很大的技术缺陷，该技术仍然无法适用于农药多残留的同步检测。此外，固相抗体的均一性较难控制导致该方法重现性较差。对于一些农药如草甘膦原本由于其本身的拉曼活性较弱和没有可以吸附到SERS基底上的基团，很难通过常规的方法将其检测出来，单凭依靠开发新型SERS活性基底去提高弱特征峰分子的检测灵敏度仅仅是一个权宜之计。因此，研究和开发新的SERS检测分析体系将会是一个新的突破点。

SERS标记技术是现代生物标记方法与SERS光谱方法相结合而发展起来的是一种新型的SERS检测方法，因其具有灵敏度高、特异性强、简便快速、不受水影响等特点，特别是SERS信号很少受光致褪色的影响、SERS标记物不会发生自碎灭等优点，逐渐成为近年生物监测方向的一个研究热点。SERS免疫标记技术的研究还处在起步阶段，还存在不少尚待解决的问题。截至目前为止，尚未见SERS免疫标记技术对农药多残留检测的研究报道，其中主要原因是农药物质分子量小，功能基团较少，不适用传统免疫夹心法，特别是对于SERS信号较弱的农药分子需要依赖于标记探针分子灵敏度。鉴于目前SERS免疫标记技术的发展现状，为了实现多种农药小分子物质的同步检测，一方面需要进一步发展SERS的多组分标记技术，筛选合适的不同拉曼特征信号标记分子，制备高灵敏多组分标记探针；另一方面研究SERS免疫标记技术检测模式，克服免疫夹心法对小分子物质结合活性位点少而导致检测灵敏度低的技术缺陷。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容