[发明专利]一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法

说明书

本发明公开了一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：外植体启动培养阶段——丛芽培养阶段——壮苗培养挑选阶段——生根成苗培育阶段，植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，本发明中杂交兰十八格格茎尖组织培养装置有益效果，通过培养基配方和接种时间的控制，减少褐化现象，更实用，利用组织培养技术由杂交兰茎尖长芽，再以芽繁芽的方式，减少变异，从而可得到大量性状一致的种苗，是商业化生产杂交兰的最佳途径。

技术领域

本发明属于杂交兰十八格格的茎尖培养方式，具体涉及一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

兰花，兰花宜种植于空气流通的环境，性喜阴，忌阳光直射，喜湿润，忌干燥，15℃至30℃最宜生长。35℃以上生长不良，5℃以下的严寒会影响其生长力，这时，兰花常处于休眠状态。如气温太高加上阳光曝晒则一两天内即出现叶子灼伤或枯焦附生或地生草本，叶数枚至多枚，通常生于假鳞茎基部或下部节上，二列，带状或罕有倒披针形至狭椭圆形，基部一般有宽阔的鞘并围抱假鳞茎，有关节，而杂交兰十八格格，是杂交兰中的一个栽培品种，目前该品种成品花大多数从韩国和我国台湾进口，该品种成品花株型较小且优美，叶片细长，秀丽，有光泽，花瓣绿色，唇瓣呈白色，有淡粉色虎斑，香气清幽，在兰界有“十八格格”的美誉，传统栽培方式，均通过分株繁殖，其缺点在于，植株繁殖周期长，且繁殖率低，难以满足规模化生产的需要，缺乏一种快速规模化培育的方式，存在改进，且传统的植株在分株繁殖时，选用的植物植株多采用无菌水冲洗方式，其消毒灭菌后的植物嫩芽容易残留细菌，消毒不彻底，存在改进，且传统的培养方式在植株嫩芽增殖阶段褐化现象明显，缺乏系统避免方法，存在不足。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，以解决上述背景技术中提出的目前，用牙刷轻轻刷洗杂交兰十八格格的新生小芽，并用流动的水冲洗杂交兰外植体，改进外植体材料表面的消毒技术，在外植体消毒过程中两次剥掉叶片，控制茎尖切的大小，让杂交兰十八格格外植体的启动率达到60％，获得无菌材料，更安全实用，杂交兰增殖阶段褐化现象明显，通过培养基配方和接种时间的控制，减少褐化现象，在杂交兰的规模化生产过程中，整齐出苗十分重要。壮苗阶段筛除芽球，长势不好的小芽，能够更整齐的出苗，本发明优化培养基类型，整个组培过程分四个阶段：外植体启动、丛芽增殖、壮苗培养、生根成苗；只使用了两种培养基：丛芽增殖使用一种，外植体启动、壮苗培养和生根成苗阶段，使用同一种不加激素的培养基。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：

步骤一：外植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟，无菌水冲洗3-4次，然后用无菌解剖刀剥掉外围叶片，然后用0.1％氯化汞溶液(加一滴洗洁精为展着剂)浸泡并摇动10-15分钟，用无菌水冲洗3-4次，然后可将处理后的嫩芽放置到带有筛孔的过滤板上，然后在过滤板上端加设风机，利用风力加速嫩芽水分水分晾干，用无菌解剖刀剥掉叶片，茎尖切成0.6-1CM高度，每瓶培养基接种一个茎尖，避免交叉污染，将消毒后的茎尖接种到启动培养基：美国花宝1号+马铃薯汁5000-15000mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L+活性炭1g/L上，暗培养一周，然后使用一支日光灯光照培养，每天光照12小时，经过3个月的培养，外植体启动成功率达到60％，一个茎尖上有1-2个小芽长出来，并且有根长出来。