[发明专利]用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组、试剂、试剂盒和检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组、试剂、试剂盒和检测方法。本发明提供一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组，包括如SEQ ID NO.1所示单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示单链DNA分子。通过试验证明：本发明的引物组特异性好、灵敏度高、检测时间短、不需要特殊的仪器，实验时间成本，操作的简便度和检测成本明显降低。含有该引物组的试剂或试剂盒可以特异性的检测、鉴定CVA16，且基于该引物组建立的致手足口病毒CVA16的RPA检测方法灵敏、准确、简便和快速，可以实现对致手足口病毒CVA16的筛选及快速诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组、试剂、试剂盒和检测方法。

背景技术

手足口病属于全球范围内流行的儿童疾病，主要临床表现为发热，手、足、口腔等主要部位出现疱疹和皮疹，少部分患儿可能会伴随脑水肿、脑炎、急性或者迟缓性麻痹等严重并发症，该病进展迅速，具有较高的病死率。该病的致病原因主要是肠道病毒和其他病原菌的感染。该病由于其传播速度快，易于在小学、幼儿园等人流密集的地方迅速传播。手足口病患儿的预后一般较好，但是中枢神经受损的患儿可能会留下不同程度的后遗症，如果伴随肺出血以及脑水肿等严重并发症是可能会造成患儿的死亡。

柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16，CVA16)与肠道病毒71型(enterovirustype 71，EV71)均为手足口病的主要致病原，EV71所致的手足口病通常症状更典型、并发症的发生率和致死率均较高。然而CVA16是手足口病和疱疹性咽峡炎更主要的致病原，两者交替流行或共同流行时，其感染所致疾病在临床表现往往难以鉴别，这对病例处理及流行防控措施的及时性极为不利。由于不同型病毒所导致的手足口病的治疗方式不同，及时准确区分不同型致病病毒对患儿的治疗尤为重要。

目前对于致手足口病毒的检测有各种不同的方法，均有各自的优缺点，细胞病变效应检测法是最容易、简便的方法，但是实验周期太长且灵敏度低。免疫荧光法和Westernblot法所需时间和检测到的结果基本一致，对于病毒感染量有一定要求，较低的感染量无法检测病毒。随着生物医疗研究发展的不断深入，不同分子生物学方法在手足口的检测中应用越来越多，其特点在于：检测方法简便、耗时短、灵敏性高。在手足口病标本检测中，实时荧光聚合酶链反应(realtime polymerase chain reaction，Real-Time PCR)、一步法RT-PCR、巢式PCR法应用最为普遍，其中实时荧光定量PCR的操作简便，且在手足口病标本检测中的准确率较高，是目前手足口检测中最常用的一种检测方法。然而传统基于PCR的方法需要变性、退火、延伸三个步骤，每个步骤的温度不一样，需要专门的热循环仪来进行，限制了其使用范围。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组，本发明的第二目的在于提供一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的试剂，本发明的第三目的在于提供一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的试剂盒，本发明的第四目的在于提供上述引物组、试剂和试剂盒的应用，本发明的第五目的在于提供一种鉴定致手足口病毒CVA16的检测方法，以缓解现有技术中检测CVA16时，灵敏度低、耗时长、操作繁琐或成本高的技术问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的引物组，所述引物组包括如SEQ ID NO.1所示单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示单链DNA分子。

一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒CVA16的试剂，所述试剂包括上述引物组。

进一步地，所述试剂包括阳性对照样品；