[发明专利]一种cGAMP生物合成方法在审
| 申请号： | 201811338217.8 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN111172223A | 公开（公告）日： | 2020-05-19 |
| 发明（设计）人： | 张学敏;李涛;周涛;李爱玲;何昆;刘朝山;夏天 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12P19/36 | 分类号： | C12P19/36 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 100850*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cgamp 生物 合成 方法 | ||
1.一种合成cGAMP的方法，包括如下步骤：在蛋白G3BP1和DNA的作用下，用核苷转移酶cGAS催化底物ATP和GTP，合成cGAMP。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述cGAS、所述G3BP1、所述ATP、所述GTP和所述DNA的配比为8μg：8μg：100nM：100nM：1μg。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述底物ATP、GTP和DNA均存在于反应缓冲溶液中；
所述反应缓冲液包括ATP、GTP、DNA、MgCl2和HEPES；
所述cGAS、所述G3BP1、所述ATP、所述GTP、所述DNA、所述MgCl2和所述HEPES的配比为8μg：8μg：100nmol：100nmol：1μg：250nmol：1μmol。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述反应缓冲液由5mM MgCl2、2mM ATP、2mMGTP、0.02mg/ml DNA、20mM HEPES和水组成；且所述反应缓冲液的pH值为7.5。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：
所述在蛋白G3BP1和DNA的作用下，用核苷转移酶cGAS催化底物ATP和GTP，合成cGAMP的方法包括如下步骤：将所述核苷转移酶cGAS和所述蛋白G3BP1溶解在所述反应缓冲液中，反应，得到cGAMP。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述反应的时间为1小时，所述反应的温度为37度。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：
在所述催化后，还包括如下步骤：用甲醇和乙腈萃取催化得到的产物，收集上清液，干燥后得到cGAMP。
8.蛋白G3BP1在促进核苷转移酶cGAS催化底物ATP、GTP和DNA合成cGAMP中的应用。
9.蛋白G3BP1在提高核苷转移酶cGAS催化底物ATP、GTP和DNA合成cGAMP产量中的应用。
10.一种提高cGAMP产量的方法，为权利要求1-7任一所述方法合成cGAMP；所述cGAMP产量高于仅用核苷转移酶cGAS催化ATP、GTP和DNA合成的cGAMP产量。
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