[发明专利]一种靶向复合外泌体及其制备方法

权利要求书

1.一种靶向复合外泌体的制备方法，包括如下步骤：

1)采用靶向多肽对外泌体进行靶向修饰，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体；

2)将所述步骤1)的膜修饰有靶向多肽的外泌体、药物、纳米四氧化三铁水溶液和电穿孔缓冲液混合，在2～6℃下进行电穿孔处理后，将得到的靶向复合外泌体初体在35～40℃下孵育25～35min，得到靶向复合外泌体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中靶向修饰的方法包括以下步骤：

a、将PBS、NHS和4-戊炔酸混合后，调整pH至7.2～7.5，在2～6℃下震荡50～70min，得到第一反应体系；

所述PBS、NHS和4-戊炔酸的质量体积比为1mL:35mg:29mg；

b、将所述步骤a的第一反应体系与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐混合，在2～6℃下震荡50～70min，得到第二反应体系；所述第二反应体系中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的终浓度为0.3mol/L；

c、将所述步骤b的第二反应体系与含有外泌体的PBS溶液混合后，依次进行震荡、超滤，得到膜连接炔键的外泌体；

所述第二反应体系与含有外泌体的PBS溶液的体积比为2：75；

d、在所述步骤c的膜连接炔键的外泌体中依次加入PBS溶液、无水硫酸铜溶液、L-抗坏血酸溶液、二水合红菲绕啉溶液和含叠氮的多肽，在20～25℃充氮振荡2.5～3.5h，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中含有外泌体的PBS溶液中外泌体的质量与PBS溶液的体积比为16μg:15μL。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中震荡的时间为22～26h，震荡时的温度为18～22℃。

5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中超滤用膜的截留分子量为100KDa。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤d中膜连接炔键的外泌体、PBS溶液、无水硫酸铜溶液、L-抗坏血酸溶液、二水合红菲绕啉溶液和含叠氮的多肽的质量体积比为160μg～65μg：300μL～310μL：14μL～15μL：71～75μL：32.8～35μL：0.2～2.1mg。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中膜修饰有靶向多肽的外泌体、药物、纳米四氧化三铁水溶液和电穿孔缓冲液的质量体积比为900～1100μg：2900～3100μg：90～110μg：1～1.1mL。

8.根据权利要求1或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中电穿孔缓冲溶液为40～60mmol/L的海藻糖PBS溶液。

9.根据权利要求1或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中所述电穿孔处理的电压为390～410v，所述电穿孔处理的电容为140～160μF，所述电穿孔处理的放电时间为0.9～1.1ms。

10.权利要求1～9任意一项方法制备得到的靶向复合外泌体。