[发明专利]HPLC-DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度

说明书

本发明涉及精神病类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及HPLC‑DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度。本发明提供了测定服用喹硫平药物后血清中喹硫平浓度的方法，所述方法包括人血清样本预处理步骤和高效液相色谱(HPLC‑DAD)分析步骤。本发明建立了专属性强、灵敏度高和重现性好的HPLC‑DAD方法。本发明首次建立的测定喹硫平血药浓度的方法在准确度、精密度、专属性、稳定性等方面的验证结果均符合2015年版中华人民共和国药典相关指导原则(9012)对生物样品的分析要求。

技术领域

本发明涉及精神病类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及HPLC-DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度。

背景技术

喹硫平是一种新的非典型抗精神病药，为脑中多种神经递质受体拮抗剂，主要作用于5-HT₂、D₁、D₂及D₄受体，对精神分裂症疗效肯定，安全性好，不良反应少。受基因多态性影响，体内代谢过程存在较大的个体差异，血药浓度与临床疗效和不良反应密切相关，根据血药浓度来调整给药剂量可以保证药物疗效和减少不良反应，以实现个体化用药。所以监测患者血药浓度在临床用药中具有重大意义。

目前国内外检测人血液中喹硫平的方法主要有高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-二极管阵列检测法、高效液相色谱-电喷雾串联质谱法等。其中高效液相色谱质谱联用法成本较高，故目前检测人血清中喹硫平浓度的方法首选高效液相色谱法。但以往方法存在前处理复杂、灵敏度低、定量分析范围窄、外标法定量易导致结果不够准确等问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提出HPLC-DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度。

具体技术方案如下：

HPLC-DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度，它包括以下步骤：

(一)标准工作液的配制

(1)标准工作液的配制：

精确称取富马酸喹硫平标准品5.57mg于15mL离心管中，用甲醇溶解，配成喹硫平浓度为1.0mg/mL的储备液S1，将标准储备液 S1用甲醇进行稀释，分别在含有1.0-60μg/mL喹硫平的范围内配制系列标准工作液，于-80℃冰箱冷冻保存；

(2)内标工作液的配制

精密称取染料木素标准品2.31mg于5mL离心管中，用甲醇溶解，配成浓度为1.0mg/mL的储备液ISS1，将标准储备液ISS1用甲醇进行稀释，得到浓度为10μg/mL的内标工作液，于-80℃冰箱冷冻保存；

(二)血清样本的制备

(3)取空白血液至少5mL，在离心速度3500rpm下离心10min，取上清液得空白血清，将步骤(1)中所述的系列标准工作液10μL 分别和上述步骤中的空白血清190μL混合制成的喹硫平药物浓度为 50-3000ng/mL的标准工作血清；

(4)取待测血液至少5mL，在离心速度3500rpm下离心10min，取上清液得待测血清，上述血清置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；

(三)血清样品处理

(5)用移液枪移取10μL步骤(2)中所述内标工作液于1.5mL 离心管中，然后加入200μL步骤(二)中所述血清，在2000rpm 的转速下涡旋混合3min；

(6)用移液枪移取800μL含有0％-30％正己烷的甲基叔丁基醚萃取剂加入步骤(5)的离心管中，在2000rpm的转速下涡旋混合3 min，以达到充分萃取的目的，然后在14000rpm的转速下高速离心 5min，得到上清液；

(7)取步骤(6)中所述的上清液750μL置于另一只1.5mL 离心管中，常温下用氮气缓慢吹干；