[发明专利]一种NK细胞诱导试剂盒

说明书

本发明公开了一种NK诱导试剂盒，是由以下浓度的组分组成的，CD3因子:1～500ng/m L胸腺肽：1～150ng/m LIL‑7：1～300ng/m L IL‑15：1～300ng/m LIL‑21：1～300ng/m L IL‑2：200U～2000U/m L。本发明的NK诱导试剂盒，无滋养层细胞，为纯因子诱导试剂盒，安全性更高，同时本发明实例3诱导出的NK细胞高达90%以上，纯度更高，同时细胞数可以达到40亿以上，并支持脐带血，外周血、浓白，冻存PBMC等样本的培养，适应性更强。

技术领域

本发明涉及生物、医学领域，具体是涉及一种NK细胞的无血清培养诱导试剂盒。

背景技术

肿瘤过继免疫治疗（adoptiveimmunotherapy，ACI）是指通过向肿瘤患者输注具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。它包括非特异性激活和特异性激活的效应细胞，前者是采用非特异性刺激因子（IL-2、干扰素）刺激前体效应细胞，使其活化为具有抗肿瘤活性的效应细胞，如NK、LAK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine induced killer cells，CIK）等；特异性激活的效应细胞是指采用肿瘤抗原作刺激物所诱导的抗肿瘤效应细胞，如树突状细胞（DC），细胞毒T淋巴细胞（CD8⁺细胞）等。ACI可通过体外扩增筛选出高活性的免疫效应细胞，将其转入宿主体内并建立长期的特异性抗肿瘤免疫效应，克服了疫苗免疫治疗的诸多缺陷，具有良好的应用前景。

NK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IL-7 IL-2 IL-12,TNF-a等)的作用下培养获得的一群以CD3^-CD56⁺细胞，其既具有强大的抗肿瘤活性，又具有非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。NK细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增等特点。

传统对NK体外扩增的方法为从人外周血内提取单个核细胞，体外添加干扰素、CD3、介素2、IL-7进行诱导培养连续14天。传统方法细胞增殖慢、倍增时间长、细胞CD3^-CD56⁺阳性率比例不稳定。并且由于采用含肿瘤滋养层细胞激活有伦理问题，同时临床不确定的危害都无法评估。并且由于滋养层细胞不稳定无法进行后期质量控制，无法在工业上大规模生产。因此亟需开发能克服上述缺陷的NK细胞诱导扩增试剂盒。

发明内容

针对上述现有的技术，本发明提供一种培养NK细胞的试剂，其特征在于使用此试剂盒培养。用本发明的试剂盒最终诱导的NK细胞总数在14天内可达到6×10⁹，CD3^-CD56⁺阳性率最低65%，最高可达到93%，细胞存活率大于95%。本发明的因子试剂盒还有稳定性好可质控的特点。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种NK细胞诱导的试剂盒，是由以下浓度的组分组成的，各浓度单位若无特别说明，均为ng/mL：

CD3因子: 1～500ng/m L；

胸腺肽：1～150ng/ m L；

IL-7： 1～300ng/m L；

IL-15：1～300ng/m L；

IL-21：1～300ng/m L；

IL-2： 200U～2000U/m ；L

余量为PBS。

以上所述因子均为临床应用，安全性更可靠。

附图说明

图1：NK细胞倍增曲线。

图2：NK细胞表型图谱。

具体实施方式