[发明专利]猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体

说明书

本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及以一种猪流行性腹泻病毒M蛋白单域抗体。

背景技术

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染引起的猪的一种高度接触性肠道传染病。感染PEDV的病猪主要通过粪便传播病毒，发病猪主要表现腹泻、呕吐和脱水等临床特征，是导致哺乳仔猪死亡的主要传染病之一。1971年，PED首次在英国发生，随后扩散到世界各地。我国于1980年首次分离到PEDV，2010年国内大部分养猪地区发生PED疫情，从哺乳仔猪到繁殖母猪均有发病，给养猪户造成了严重地经济损失。PEDV属于尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronavi ridae)冠状病毒属(Coronav irus)，基因组是单股正链具有感染性的RNA ,与其他冠状病毒相似, 基因组5′端有一个帽子结构(cap), 3′端有1个Poly (A)尾, 基因组全长为2,8033 nt，分别编码S、E、M和N等4个病毒结构蛋白。S担保存在的中和表位能够诱导机体产生中和抗体，对仔猪具有良好的保护效果。PEDV感染早期，机体能够产生抗N和N蛋白的高水平抗体，是研发病毒血清抗体诊断方法的候选抗原。E蛋白在抗病毒研究方面具有应用前景。

骆驼属外周血中存在的天然缺失轻链的重链抗体（variable domain of theheavy chain of HCAbs，VHH）具有其他陆生生物所不具备的生物学特征，它的抗原结合位点仅由重链可变区单一结构域组成，却同普通IgG抗体一样保持着良好和特异的抗原结合能力。VHH是目前可以得到的、具有完整功能的、最小IgG抗体分子片段，分子量为15kDa，是常规IgG的1/10，单克隆抗体的1/3，分子高度4.8nm，直径2.2纳米，也称为纳米抗体（nanobody）。VHH抗体抗原结合位点具有伸展的抗原互补结合区和组织穿透性，可结合普通IgG抗体无法接触的抗原表位。另外，体外重组VHH具有易表达和水溶性好等独特性质，在作为小型化基因工程抗体、小分子抗体药物和高灵敏度诊断试剂研发领域具有广阔应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体；

本发明的另一个目的是提供一种编码所述猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体的核苷酸序列；

本发明的再一个目的是提供所述的猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体或其编码序列在E.coli中的表达。

本发明采用以下技术方案，一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ IDNO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。

一种重组表达载体，含有上述的核苷酸序列。

一种宿主细胞，所述的宿主细胞为含有上述的核苷酸序列的原核细胞。

优选的，所述宿主细胞为含有上述表达载体的原核细胞。

所述猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体或其编码序列在E.coli中的表达。