[发明专利]一种脂肪干细胞无血清培养基

说明书

本发明公开了一种人脂肪干细胞无血清培养基，主要成分包括氨基酸，无机盐成分，生长因子及白蛋白成分。本发明提供了一种人脂肪干细胞无血清培养基，其不含动物源成分，可以完全实现无血清培养干细胞。采用本发明的无血清培养基培养人脂肪干细胞，可在体外获得高数量、高纯度并且安全优质的间充质干细胞，同时可提高细胞存活率，维持干细胞的特性。本发明可解决细胞数量不够的问题，且每批次的细胞数量、存活率及免疫表型更加稳定。

技术领域

本发明涉及一种人脂肪干细胞无血清培养基，属于细胞工程技术领域。

背景技术

间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）来源于中胚层，也称多能间充质基质细胞（multipotent mesenchymal stromal cells），为多能干细胞的一种，它最早发现于骨髓中，具有向三种胚层细胞分化的多向分化潜能，具有低免疫原性、不刺激产生同种异体免疫反应、不被细胞毒性T细胞和NK细胞杀伤，以及免疫调节作用。MSCs在相应的诱导条件下能分化为骨、脂肪、软骨、肌肉和肝细胞等不同类型细胞。脂肪干细胞（adipose derivedstem cslls，ADSC）是一种存在于脂肪组织中的成体间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSC）。在特定诱导条件下可以分化为不同胚层细胞和组织。2001年脂肪干细胞首次通过吸脂手术并从人脂肪组织悬液中分离获得。由于人脂肪组织含量丰富且容易获得，所以脂肪干细胞是成体干细胞的又一丰富补充来源。此外，脂肪干细胞不表达 II 类主要组织相容性复合体，表明脂肪干细胞具有低免疫原性的特点，适合同种异体移植。基于以上获取简便、来源广泛、高分化潜能和低免疫原性等优势，脂肪干细胞被广泛应用于细胞工程、组织工程、医学等各个领域，并有着广阔的发展前景。

细胞培养基是决定细胞体外生长代谢最重要、最直接的环境因素。目前大多数合成细胞培养基均需要补充动物血清才能支持细胞的体外生长、增殖。传统含血清培养基成分复杂且不明确，无法证明其安全性，批次之间差异较大，无法满足干细胞相关药物及干细胞医疗的开发要求。另外，市售无血清培养基不仅价格昂贵，而且对于脂肪干细胞培养针对性不强，故而造成培养效果并不理想，脂肪干细胞生长缓慢且传代不稳定。为解决现存问题，我们针对于脂肪干细胞特点开发出了一种脂肪干细胞无血清培养基，保留无血清培养基优点的同时，更适合对脂肪干细胞进行培养。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种人脂肪干细胞无血清培养基，其不含动物源成分，可以完全实现无血清培养干细胞。采用本发明的无血清培养基培养人脂肪干细胞，可在体外获得高数量、高纯度并且安全优质的间充质干细胞，同时可提高细胞存活率，维持干细胞的特性。本发明可解决细胞数量不够的问题，且每批次的细胞数量、存活率及免疫表型更加稳定。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种人脂肪干细胞无血清培养基，是由以下浓度的组分组成的，各浓度单位若无特别说明，均为mg/L：

L-精氨酸 105～305；

CuSO₄·5H₂O 0.0006～0.005；

L-天门冬酰胺28～70；

L-天门冬氨酸12～32；

L-谷氨酸 15～35；

Ni（NO₃）₂·6H₂O 0.000032～0.0003；

L-谷氨酰胺0～500；

ZnSO₄·7H₂O 0.065～0.65；

甘氨酸 5～20；