[发明专利]一种免疫增强剂组合和编码核酸及其应用

说明书

本发明提供了一种免疫增强剂组合，所述的组合物包含Bcl2、CD40L、IL15以及IL15受体α（IL15Ra）。具体的，提供了包含所述组合的融合蛋白、编码所述组合物各组分蛋白的核酸。所述的组合物包含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所述的氨基酸序列。还提供了包含所述组合物的疫苗组合物以及该组合物的递送途径。本发明的免疫增强剂组合物可以提供免于病原体感染的保护性免疫，并且可以用于预防和/或者治疗多种肿瘤。

技术领域

本发明涉及医药制品领域，具体地，是一种免疫增强剂组合和编码核酸及其用途。

背景技术

机体的免疫反应首先是由抗原递呈细胞(APC)捕获抗原，经过加工和处理后将抗原信息递呈给淋巴细胞，继而引发一系列的特异性免疫应答。树突状细胞(DC)是目前认为的功能最强的APC，其最大的特点是能够刺激初始型T细胞（Naive T cells）的增殖和活化，是启动、调控并维持特异性免疫应答的中心环节。在机体抗肿瘤免疫中，由T细胞介导的细胞免疫发挥着重要作用。

研究发现，肿瘤患者存在DC数量减少及功能缺陷的特点，肿瘤组织及其周围浸润DC的数量、功能与肿瘤的发生、发展、转移、预后有着密切的关系。DC密集浸润的肿瘤分化程度高，预后较好；而DC轻度浸润的肿瘤常伴有分化程度低和恶性进展。肿瘤细胞具有较高水平的Fas表达，能诱导FasL表达的淋巴细胞凋亡，并能分泌TGF-β、IL-10 等免疫抑制性细胞因子，导致抗原提呈能力下降，从而逃避免疫攻击。

近年来，已经清楚了免疫系统确实识别肿瘤抗原，但是尽管存在肿瘤抗原，T细胞确保持静止状态。基于此现象，有学说：患者体内的抗原呈递细胞，不能正确识别肿瘤抗原，将之呈递给T淋巴细胞，引起肿瘤特异的免疫应答。近年来，如何增加抗原呈递细胞的数量，提高抗原呈递细胞，特别是DC细胞摄取、转运、呈递抗原、刺激T细胞的能力，是目前肿瘤免疫研究中的一个重点。

大量研究表明，CD40-CD40L介导的信号能够诱导APC的活化。后者在激活肿瘤特异性免疫杀伤T细胞中发挥着重要作用：提供抗原刺激信号和第二信号，两者协同作用启动免疫级联反应，发挥肿瘤免疫功能。同时，研究发现CD40L还可以维持DC细胞的活化、生存和CD8+ T细胞的扩增，并能拮抗IL-10细胞因子对DC细胞分化、成熟和功能的抑制效应。

CD40L分子可以与DC表面CD40相互作用激活DC，促进APC共刺激分子表达和细胞因子分泌。活化的DC是肿瘤细胞与肿瘤特异性免疫杀伤T细胞之间的桥梁，能呈递肿瘤抗原给T细胞和激活T细胞，产生肿瘤特异性杀伤T细胞。因此，通过CD40-CD40L信号分子途径激活DC，可以增强对弱免疫原性肿瘤细胞抗原的递呈，诱导肿瘤特异性免疫。

IL-15是一种与IL-2结构类似的细胞因子，广泛表达在各种细胞和组织中，如单核细胞，巨噬细胞，Dc细胞，纤维细胞等。IL-15通过与IL-15受体α结合，激活下游的JAK1，JAK3，导致下游STAT3和STAT5的磷酸化和信号通路的激活，诱导BCL2、MAP激酶通路、Lck和syk的磷酸化，导致细胞的增殖和成熟。

IL-15能够调节T细胞和NK细胞的活化和增殖，能够维持在缺乏抗原刺激下记忆性T细胞的存活。有研究证明，在啮齿类动物的淋巴细胞中，IL-15通过诱导BCL2L1/BCL-x(L)而抑制凋亡。同样的，在人体内也发现Il-15通过诱导BCL2和/或Bcl-xL抑制T淋巴细胞的凋亡。

最近，有研究者使用NDV为载体，构建了一种表达重组Il-15蛋白的DNA肿瘤疫苗。临床前的结果显示，在小鼠模型中，该肿瘤疫苗表现出了控制黑色素瘤生长的潜力。同样的，一种表达流感病毒A蛋白和Il-15的重组牛痘病毒，能够促进CD4+ T细胞的交叉保护。另一个包含有Il-15基因的重组布鲁氏菌DNA疫苗在小鼠中表现出增强CD8+ T细胞免疫应答的能力。