[发明专利]基于黑尾叶蝉actin基因启动子的昆虫细胞外源蛋白表达载体

权利要求书

1.黑尾叶蝉actin基因启动子，其特征在于：所述启动子序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种含有权利要求1所述的黑尾叶蝉actin基因启动子的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体。

3.如权利要求2所述的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体的构建方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1） 瞬时表达载体构建：

以真核表达载体pEGFP-N1作为骨架，利用Ase I / Xho I酶切删除已有的CMV的启动子序列；利用改造后的载体中的EcoRI / BamH I酶切位点将扩增的黑尾叶蝉actin基因启动子序列整合到载体中；构建得到以叶蝉Actin基因上游序列为启动子，以SV40病毒ployA区域作为终止子，表达绿色荧光蛋白的叶蝉细胞转染载体Nc_Cyto-GFP载体；

（2） 瞬时表达载体优化：

在actin启动子5’段整合Hr5 增强子序列，得到载体Nc_Hr5cyto-GFP，提高瞬时载体的转录效率。

4.根据权利要求3所述的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体的构建方法，其特征在于，步骤（2）具体方法如下，利用Nc_Cyto-GFP载体中的EcoRI酶切位点，将质粒线性化，利用引物F-Hr5:ATCTCGAGCTCAAGCTTCGAATTCCGCGTAAAACACAATCAAGT及R-Hr5:AAAAGCTTGGCGGCGTGAATTCACGCGTAGAATTCTACCCGTAA，以pIE1-LUC质粒为模板，将Hr5增强子序列扩增下来，并且通过Gibson assembly的克隆方法，将Hr5增强子序列整合到Nc_Cyto-GFP载体中，最终构建成应用于黑尾叶蝉细胞表达外源蛋白的载体Nc_Hr5cyto-GFP。