[发明专利]一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法在审
| 申请号： | 201811346334.9 | 申请日： | 2018-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN109374878A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 杨广宇;王存理;谢渊 | 申请（专利权）人： | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/50 | 分类号： | G01N33/50;G01N21/31;G01N21/75 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 悬浮液 酶法检测 磷脂酶 脂蛋白 取用 蒸馏水 上层 备用 测量 磷脂酰胆碱溶液 氢氧化钠水溶液 氢氧化钠溶液 瓶塞 对硝基苯酚 蒸馏水定容 常规实验 丁二酸酐 溶液溶解 血样 测定物 校准液 称取 豆蔻 烧瓶 下层 种液 酰基 调配 中层 | ||
1.一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
步骤一、准备所需药剂：HEPES溶液、1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液、氢氧化钠溶液、脂蛋白磷脂酶A2校准液和蒸馏水备用，以及若干份血样。
步骤二、HEPES缓冲液调配：称取238.3gHEPES溶液溶解在800ml蒸馏水中，加入1-2M氢氧化钠水溶液调节至所需pH值，取用蒸馏水定容至1000mL，用带有瓶塞的烧瓶在4摄氏度存放备用。
步骤三、血样配置，选取2mL血样，添加8mL蒸馏水，利用蒸馏水使细胞破裂，然后静置15分钟，使血样分层，分别取上层、中层和下层的悬浮液与三只试管中，贴标签备用，且三支试管样品均为1.1mL。
步骤四、脂蛋白磷脂酶A2测定：三种血样试剂均取用1mL、1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液100mL和HEPES缓冲液25mL，将1-豆蔻酰基-2-(4-对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液与血样混合，置于漩涡振荡器上搅拌均匀，水浴5min，然后向样品中加入HEPES缓冲液，再次使用漩涡振荡器上混合均匀，然后加入脂蛋白磷脂酶A2校准液，调节pH值至7，将混合后的溶液放在恒温箱内恒温反应2min。
步骤五、光谱分析：恒温反应结束后，用光谱仪对反应后的溶液进行光谱分析，读取其初始吸光度，然后连续监测4分钟，将溶液的吸光度变化列表，分析脂蛋白内磷脂酶A2的活性和浓度。
2.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述药剂准备步骤中，各预备药剂应在所需基础上留有余量，便于不足时使用。
3.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述脂蛋白磷脂酶A2测定工序中，使用恒温箱保温时，温度保持在37℃，且需使用热风式恒温箱，避免加热管产生的热辐射影响反应。
4.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述脂蛋白磷脂酶A2测定步骤中，水浴15min时，采用恒温水浴锅，并保持在37℃，时刻用温度计测量温度。
5.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述整体实验测定，应同时进行2-3组实验，消除试验中的人为误差。
6.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述光谱分析步骤，各组数据应采用同一台光谱仪，消除仪器误差，且需制成对比表格。
7.根据权利要求1所述的一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述整体实验过程应处于无尘环境中，实验人员及器具实验前应消毒杀菌。
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