[发明专利]降低细胞胁迫伤害及改善超低温保存效果的Y2SK2脱水素

权利要求书

1.一种玻璃化超低温保存溶液，其特征在于，所述溶液为含有20-40％w/v丙三醇，10-20％w/v乙二醇，10-20％w/v二甲基亚砜，0.2-0.6mol/L蔗糖以及0.5-2μmol/L百子莲脱水素蛋白ApY₂SK₂的MS培养液；所述溶液中百子莲脱水素蛋白ApY₂SK₂是通过包含如下步骤的方法获得的：取诱导表达后的Transetta(DE3)原核表达大肠杆菌菌液，煮沸裂解，对原核表达的百子莲脱水素蛋白ApY₂SK₂进行纯化富集；煮沸裂解后的大肠杆菌样品冷却至室温后，离心收集上清液，即为纯化后的百子莲脱水素蛋白ApY₂SK₂。

2.如权利要求1所述的玻璃化超低温保存溶液，其特征在于，大肠杆菌表达蛋白ApY₂SK₂的最佳诱导条件为：将含有ApY₂SK₂重组质粒的Transetta菌种接种于LB液体培养基，在37℃，200rpm的条件下大肠杆菌培养至生长对数中期，此时菌液OD₆₀₀＝0.5-1.0；添加IPTG至终浓度为1.0-1.5mM，在30-37℃条件下诱导表达4～8h。

3.一种利用如权利要求1或2所述的玻璃化超低温保存溶液对植物种质资源进行超低温保存的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、对植物种子进行消毒、培养，取萌发36h-72h幼苗；

S2、将所述幼苗在装载液中浸泡处理15-30min；所述装载液为含有2mol/L丙三醇、0.4mol/L蔗糖的MS培养液；

S3、将步骤S2处理后的幼苗移至所述玻璃化超低温保存溶液，在0-4℃条件下浸泡脱水处理40-60min；

S4、取出步骤S3处理后的幼苗迅速置于液氮中保存1h以上。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括超低温保存后幼苗的解冻、洗涤以及再培养步骤；所述解冻为在30-50℃的水浴中解冻60-120s；所述洗涤采用的洗涤液为含有0.8-2.0mol/L蔗糖的MS培养液；所述再培养采用的恢复培养基为含有20-40g/L蔗糖的MS固体培养基。