[发明专利]RNA代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种RNA代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用。该RNA代谢标记探针为鸟嘌呤核苷酸类似物，鸟嘌呤核苷酸类似物是在鸟嘌呤核苷酸的核糖的第2位C上的‑OH被‑N₃取代。本申请通过将原来在碱基上进行修饰的方式，转化为在核糖上进行修饰，并采用鸟嘌呤核苷酸进行代谢标记，在鸟嘌呤核苷酸的核糖的第2位的碳上以叠氮基团取代羟基。该探针不仅能够实现原核RNA的代谢标记及在显微成像、新生RNA的提取测序等诸多方面的应用，而且能够实现对真核RNA的代谢标记，因而也能进一步应用于对真核RNA代谢的相关研究中。

技术领域

本发明涉及生物标记领域，具体而言，涉及一种RNA代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用。

背景技术

中心法则是生命活动的黄金规则：遗传物质由DNA携带，通过转录传递到RNA，再通过翻译由RNA传递到蛋白质，维持生命活动的稳态。RNA作为连接DNA与蛋白质的信息传递物质，起重要的协调功能。RNA主要包括mRNA、tRNA、rRNA、长非编码RNA(longnon-codingRNA)、microRNA等。

目前，真核细胞中已经有成熟的探针实现对RNA的代谢标记，比如4SU、2008年报道的EU以及2012年发展的2’-Az-A等。这一系列探针成功实现了真核细胞中RNA的代谢标记、成像以及新生成RNA的测序与研究。2008年报道的EU可以一定程度上标记原核的RNA，仅在成像上可以检测到，并且对原核有较大的毒性。

然而，到目前为止，尚未有合适的探针能够实现对原核细胞中的RNA代谢进行标记。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种RNA代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用，以解决现有技术中尚未有合适的探针能够实现对原核细胞中的RNA代谢进行标记的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种RNA代谢标记探针，RNA代谢标记探针为鸟嘌呤核苷酸类似物，鸟嘌呤核苷酸类似物是在鸟嘌呤核苷酸的核糖的第2位C上的-OH被-N₃取代。

根据本发明的第二个方面，提供了一种RNA代谢标记试剂盒，该试剂盒包括上述RNA代谢标记探针。

根据本发明的第二个方面，提供了上述RNA代谢标记探针或者上述试剂盒在对RNA进行代谢标记中的应用。

进一步地，RNA为原核RNA或真核RNA。

进一步地，原核RNA包括来源于如下任一种细胞的RNA：肺炎克雷伯菌(KlebsiellaPneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鲍曼不动杆菌(AcinetobacterBaumannil)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)、红球菌(Rhodococcus)、沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(E.coli)。

进一步地，真核RNA包括来源于如下任一种细胞的RNA：人纤维肉瘤细胞HT1080及小鼠神经瘤母细胞N2a。

进一步地，应用包括如下任意一项或多项：通过In-Gel成像的方式检测RNA代谢；通过荧光成像的方式对RNA进行荧光标记；通过RNA-Seq的方式对新生RNA转录本进行检测；通过荧光定量PCR的方式检测RNA的表达及变化；通过IP后的northern blot对RNA进行检测；通过点击反应及冷冻电镜对RNA的结构进行观察。

应用本发明的技术方案，本申请通过将原来在碱基上进行修饰的方式，转化为在核糖上进行修饰，并采用鸟嘌呤核苷酸进行代谢标记，在鸟嘌呤核苷酸的核糖的第2位的碳上以叠氮基团取代羟基。该探针不仅能够实现原核RNA的代谢标记及在显微成像、新生RNA的提取测序等诸多方面的应用，而且能够实现对真核RNA的代谢标记，因而也能进一步应用于对真核RNA代谢的相关研究中。

附图说明