[发明专利]一种同时产五种稻曲病菌毒素的稻曲病菌的鉴定方法

说明书

本发明涉及一种产稻曲病菌毒素的稻曲病菌的鉴定方法，尤其是一种同时产五种稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鉴定方法。通过菌落形态观察、孢子形态鉴定、分子生物学鉴定三部分对稻曲病菌进行鉴定。上述方法，对目标菌种有效的鉴定，确定分离方法的有效性，通过三部分鉴定，鉴定的准确性非常高。

技术领域

本发明涉及一种稻曲病菌的鉴定方法，尤其是一种同时产稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鉴定方法。

背景技术

稻曲病是一种水稻真菌病害，由稻曲病菌--绿核菌属绿核菌Ustilaginodeavirens(Cooke)Takahashi侵染水稻穗部引起。稻曲病发生较为普遍，在中国、日本、美国、印度、菲律宾等多个国家均有出现，属于世界性水稻病害。20世纪80年代前，稻曲病仅零星分布于中晚稻田，为水稻次要病害；但随着水稻品种、耕作方式、施肥用量及气候环境等因素改变，近年来，稻曲病已由过去的零星分布转变成为水稻生产中的主要病害之一。稻曲病不但在水稻穗部形成稻曲球，严重影响谷粒的生长，降低水稻的产量与品质，而且其病原真菌——稻绿核菌Ustilaginodea virens(Cooke)Takahashi所产生的稻曲病菌毒素对人畜具有毒害作用。目前，已逐渐引起了专家学者对稻曲病产生菌以及所产稻曲病菌毒素的广泛关注。

稻曲病菌属于一种寄生性较强腐生性较弱的真菌，稻曲球营养丰富，而且又暴露于自然环境中，常伴生大量的腐生细菌和真菌及其它病原菌，再加上稻绿核菌生长非常缓慢，故在培养的过程中极易受到其他病原菌的污染，因此，相对其他真菌来说，稻绿核菌的分离成功率很低。然而在实际的分离过程中，研究人员普遍发现采用稻曲球内层组织分离法可以成功分离到稻曲病菌，但其培养时间较长(培养5d后长出白色致密菌丝，菌丝生长较慢，约30d左右，颜色发生改变为淡黄色、黄色)，分离速度较慢，比较耗时。但该方法由于选用的是内部菌丝，杂菌较少，成功分离的机率较高。厚垣孢子悬液法，稻曲球经无菌水冲洗即可配制成厚垣孢子悬浮液，由于稻曲球表层伴有大量其他病原菌，它们的生长速度快于稻曲病菌的生长速度，极易污染稻曲病菌，而且生长速度过快的杂菌覆盖于少量馒头状的稻曲病菌单菌落上，加大分离纯化的难度。稻曲球法的缺点是多种病原菌伴生于稻曲球，在培养过程中亦可迅速生长而污染目标菌。菌核萌发法较易成功，有研究证明菌核是稻曲病菌高效分离的首选材料，但菌核形成受环境条件限制，不易收集获取菌核；而且南方稻区少见，采用此法分离南方稻曲病菌效果并不理想。孢子振落法，由于稻曲表面不作消毒处理，稻曲表面大量的杂菌易在培养基表面快速生长，影响厚垣孢子萌发、生长及菌落的纯化，同厚垣孢子悬浮液法一样易受其他病菌污染，不易成功获得稻曲病菌株。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种检测精确的同时产稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鉴定方法。

本发明解决技术问题的技术方案为：一种同时产稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鉴定方法，其鉴定方法分为三部分：