[发明专利]一种壳聚糖包裹玉米醇溶蛋白纳米粒的制备及负载金合欢素钠盐的应用

说明书

本发明公开了一种壳聚糖包裹玉米蛋白纳米粒的制备方法及应用。所述的纳米粒的制备方法为：将玉米蛋白的乙醇溶液加入喷瓶(雾滴粒径约10～50μm)，另将水相加入另一喷瓶(雾滴粒径约10～50μm)，将两个喷瓶在封闭式装置中对喷即得含玉米蛋白纳米粒的溶液，玉米蛋白纳米粒的粒径约160～200nm，zeta电位‑8～12mv。将适量的玉米蛋白纳米粒溶液加入壳聚糖溶液中，经孵育可得壳聚糖包裹玉米蛋白的纳米粒，壳聚糖包裹玉米蛋白纳米粒的粒径为160～180nm，zeta电位约50mv。本发明能够连续生产壳聚糖包裹玉米蛋白纳米粒，制备方法简便无污染、温和安全、产率高。用于装载金合欢素钠盐时，载药量约为20～30％，粒径190～260nm、zeta电位35～45mv，金合欢素钠盐被该纳米粒包裹后可提高其稳定性。

技术领域

本发明涉及生物医药纳米缓释技术领域，具体涉及一种壳聚糖包裹玉米醇溶蛋白纳米粒的制备方法及负载金合欢素钠盐的应用。

背景技术

玉米醇溶蛋白是玉米中主要的储藏蛋白质，占胚乳总蛋白质的35～60％，平均分子量约40kD。由于玉米醇溶蛋白中含有大量的疏水性氨基酸，如谷氨酰胺和脯氨酸；缺乏能带电的酸性、碱性氨基酸，尤其缺乏色氨酸和赖氨酸；含有较多的含硫氨基酸，由于其氨基酸组成不均衡，营养价值并不高。近年来研究发现，玉米醇溶蛋白分子结构中亲水部分和疏水部分分区明显，具有独特的自组装特性、成膜性、凝胶性，具有抗水、抗油性以及良好的生物相容性、生物粘附性。基于玉米蛋白的双亲性，可以通过经典相分离法方便得到玉米蛋白包封疏水性药物的纳米粒，但是由于分子尺度精细操控的难度较大，导致方法的重现性较差、过程不易控制，纳米粒粒径分布较宽、单纯的玉米醇溶蛋白纳米粒子稳定性较差，易于发生聚集而沉淀。

壳聚糖是天然来源的、可再生的天然聚合物之一，由甲壳素经过脱乙酰作用得到，具有优异的物理、化学性能，生物相容性好，生物可降解，在细胞培养、药物可控释放、蛋白质分离等诸多领域应用广泛。壳聚糖的分子量对其溶解度及理化性质具有显著的影响。作为天然来源的唯一的碱性多糖，可以溶解在酸性的溶液中而带有正电，从而与带负电的粒子通过静电相互作用而发生相互结合起到增加纳米粒稳定性、减少药物突释，改善靶细胞对纳米粒的内吞、摄取等作用。

金合欢素是一种首先在天山雪莲中发现的黄酮类化合物，据报道具有广泛的药理活性，如抗炎、抗肿瘤、抗氧化等。最近一系列研究发现金合欢素可以通过多离子通道阻断作用用于房颤的治疗，是一种极具潜力的抗心律失常候选化合物，但是由于其水溶性很差，限制了其的临床应用。通过磷酸酯连接制备的钠盐水溶性可以提高数千倍，并且可以在体内磷酸酯酶的作用下发生水解生成金合欢素，发挥金合欢素本身的治疗效果，可作为前药使用。但是金合欢素钠盐的化学稳定性欠佳，对高湿、高温均比较敏感，将其包裹在纳米粒中，可提高其稳定性。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种壳聚糖包裹玉米醇溶蛋白纳米粒的制备方法，该方法首先利用相对可控的相分离法制备玉米醇溶蛋白纳米粒，其次利用壳聚糖在酸性溶液中所带正电荷，与玉米醇溶蛋白纳米粒通过静电相互作用结合，制备壳聚糖包覆玉米醇溶蛋白纳米粒，从而增加玉米蛋白纳米粒的稳定性，提高制备的重现性。

本发明的第二个目的是提供该药物递送系统的应用。

为实现本发明的第一个目的，其技术方案是包括以下步骤：

(1)将玉米醇溶蛋白溶解到乙醇溶液中，加入到喷瓶中；

(2)另将去离子水或加入适量稳定剂的水相加入到另一喷瓶中；将步骤(1)和步骤(2)中所述的两个喷瓶在封闭式装置中对喷即得含玉米醇溶蛋白纳米粒的混合溶液。将所得溶液旋转蒸发30min，去除乙醇。

(3)将步骤(3)中所述的玉米醇溶蛋白纳米粒溶液加入壳聚糖溶液中，经搅拌孵育后，通过2000rpm离心10min取上清液，再通过12000rpm离心30min，收集沉淀物，即得到壳聚糖包裹玉米醇溶蛋白纳米粒。