[发明专利]一种稳定的液体型凝血酶时间测定试剂盒

说明书

本发明属于生物医学检验技术领域，涉及一种稳定的液体型凝血酶时间测定试剂盒。所述的试剂盒包括：缓冲液，酶稳定剂，防腐剂，凝血酶；其中所述酶稳定剂包括酪蛋白0.05‑1％(m/v)。

技术领域

本发明属于生物医学检验技术领域，涉及一种稳定的液体型凝血酶时间测定试剂盒。

背景技术

凝血测试属于血栓性疾病检查，其中，凝血酶时间为凝血功能检查的一个重要指标，用于检查血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力。凝血酶时间测定试剂的核心组份为凝血酶。凝血酶是一种多功能丝氨酸蛋白酶，具有与胰凝乳蛋白酶相似的序列与结构，含A、B两条多肽链，由一个链间二硫键相连。B链为功能链，具有典型的丝氨酸蛋白水解酶折叠结构，含有1个位于两个β折叠桶之间的活性中心，2个外结合位点(ExositeⅠ、ExositeⅡ)。凝血酶在凝血过程中具有多方面作用：1.主要作用是从纤维蛋白原N端水解掉四段小肽，即两个A肽和两个B肽，转变为纤维蛋白单体，进而交联成纤维蛋白凝块；释放的A肽和B肽能引起血管收缩，减小血管创面。2.激活凝血因子ⅩⅢ，激活的纤维蛋白稳定因子可促使相邻纤维蛋白单体共价交联，使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体，使最初的疏松纤维蛋白软凝块转变为较为紧密的纤维蛋白凝块。3.凝血酶属于强诱导剂，可诱导血小板发生聚集，其诱导的血小板聚集阿司匹林亦不能抑制；同时促使血小板释放出血小板第Ⅲ因子和血小板第Ⅳ因子，这两种因子在凝血过程中具有重要作用。4.凝血酶还可激活因子V和因子Ⅷ，凝血酶能使凝血因子Ⅷ和凝血因子V的活性增强。然而，凝血酶不稳定，其功能团、三维结构以及所发挥的凝血作用，会因为物理和化学条件的变化而变化。

目前市售的凝血酶产品大部分为冻干粉剂，使用前用水溶解，具有诸多不便，而液体型凝血酶试剂可克服复溶过程或冻干过程带来的缺陷，为用户带来使用的便捷，同时也提高了检测结果的准确性和精确性，但是，液体试剂也给研发者带来了诸多挑战性问题：凝血酶属于生物大分子，它的活性依赖于其自身的精细空间结构的维系，在液体状态下，蛋白质或酶的结构比较脆弱，酸、碱、温度、离子强度以及其它某些化合物(包括重价金属离子)的少量存在，都会引起这种空间结构的改变，局部结构的微小变化也会引起蛋白质或酶活性的丧失。因此，需要尽量消除可能促使蛋白质或酶发生自分解的条件。

虽然市场上已经出现了若干型号的液体型试剂，但多数稳定性不好。即使个别产品的热稳定性和长期稳定性能达到一个较高的水平，但是开盖稳定性依旧很差。

发明内容

本发明的目的在于针对上述存在的问题，提供一种稳定的液体型凝血酶时间测定试剂盒，此试剂盒不仅热稳定性和长期稳定性能好，开盖稳定性也很好。

为达到上述发明目的，本发明包括以下技术方案：一种稳定的液体型凝血酶时间测定试剂盒，所述的试剂盒包括：缓冲液，酶稳定剂，防腐剂，凝血酶；其中所述酶稳定剂包括酪蛋白0.05-1％(m/v)。

酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，分子中有较多的脯氨酸残基。酪蛋白中含有的磷酸基团具有较强的富电子性，可以蛰合溶液中不利于凝血酶稳定的金属离子，从而降低了金属离子对凝血酶氧化反应的催化作用；同时，酪蛋白也会与过氧自由基发生反应，终止蛋白质过氧化链反应，从而进一步提升了凝血酶的稳定性。因此，本发明添加酪蛋白，并合理控制它的加入浓度，会很好地提升液态环境中凝血酶的稳定性。

作为优选，所述酶稳定剂还包括牛血清蛋白、甘氨酸、明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘露醇、山梨醇中的一种或几种。

其中上述牛血清蛋白、甘氨酸、明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘露醇、山梨醇在试剂盒中的含量分别为0.05-5％(m/v)、0.1-5％(m/v)、0.1-5％(m/v)、1％-10％(m/v)、0.1％-5％(m/v)、0.1％-5％(m/v)、0.1-5％(m/v)、0.1-5％(m/v)。