[发明专利]番茄SAMDC1基因在培育无籽番茄中的应用

权利要求书

1.敲除番茄SAMDC1基因在培育无籽番茄中的应用，其特征在于，所述番茄SAMDC1基因包含以下(1)、(2)中任一所述的核苷酸序列：

(1)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

(2)任一核苷酸序列与SEQ ID NO.1所示序列有90％以上同源性且编码如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的DNA分子。

2.一种无籽番茄的培育方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1：构建含番茄SAMDC1基因敲除载体的根癌农杆菌工程菌A；

S2：将S1获得的根癌农杆菌工程菌A介导转化番茄外植体，制备得到SAMDC1基因敲除的番茄植株；

S3：将S2获得的SAMDC1基因敲除的番茄植株种植于温室中，培育得到无籽番茄；

所述番茄SAMDC1基因包含以下(1)、(2)中任一所述的核苷酸序列：

(1)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

(2)任一其核苷酸序列与SEQ ID NO.1所示序列有90％以上同源性且编码如SEQ IDNO.2所示氨基酸序列的DNA分子。

3.根据权利要求2所述的一种无籽番茄的培育方法，其特征在于，S1所述的番茄SAMDC1基因敲除是通过CRISPR/Cas9的方式实现的。

4.根据权利要求2或3所述的一种无籽番茄的培育方法，其特征在于，S1所述具体步骤为：

(1)设计SAMDC1基因的靶序列即sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，进而合成一对sgRNA引物，将sgRNA退火成双链；

(2)将步骤(1)得到的退火双链插入AtU6-sgRNA-AtUBQ-Cas9载体BbsI酶切位点，16℃连接过夜；

(3)用HindIII和KpnI双酶切AtU6-sgRNA-AtUBQ-Cas9载体，割胶回收大片段；连接到pCambia1301载体上，得到番茄SAMDC1基因的CRISPR/Cas9载体；

(4)将步骤(3)得到的番茄SAMDC1基因的CRISPR/Cas9载体转入根癌农杆菌EHA105中，得到根癌农杆菌工程菌A。

5.根据权利要求4所述的一种无籽番茄的培育方法，其特征在于，步骤(1)所述sgRNA引物的核苷酸序列如下所示：

SlSAMDC1F：5′-gattGCTCGACTCGGACAGCACAT-3′，

SlSAMDC1R：5′-aaacATGTGCTGTCCGAGTCGAGC-3′。

6.权利要求2-5任一项所述的无籽番茄的培育方法在培育无籽番茄中的应用。