[发明专利]一种细胞冻存液及其应用

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种细胞冻存液及其应用。本发明公开了一种细胞冻存液，包括以下组分：二甲基亚砜、人血白蛋白、低分子右旋糖苷、人间充质干细胞外泌体、羟乙基淀粉和基础培养基。用该细胞冻存液冻存复苏后的细胞活率高，形态变化不大，培养时不出现分化，且表面抗原检测符合标准。另外，本发明通过优化细胞冻存方案，尽可能避免细胞在冻存过程中因冰晶形成而导致细胞大量死亡，优化了冻存体系，细胞在复苏后可直接回输至人体，不添加动物来源的血清，避免了动物来源的病毒污染，且该细胞冻存液适用广泛，解决了现有的细胞冻存体系冻存的细胞经复苏后细胞活率不高的技术问题。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种细胞冻存液及其应用。

背景技术

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，避免细胞在培养过程中出现衰老、分化等现象。此外，适度地保存一定量的细胞，可防止在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。

细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5％～15％的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。采用慢冻快融的方法能较好地保证细胞存活。其中，间充质干细胞，如脂肪干细胞，骨髓干细胞，脐带干细胞等冻存体系中含有10％左右的DMSO、70-90％左右的营养添加剂，如血清，培养基等，该类型的冻存体系，细胞经过冻存复苏后，细胞活率一般维持在80-85％，细胞活率不高，直接制约冻存细胞的临床应用。

发明内容

本发明提供了一种细胞冻存液及其应用，解决了现有的细胞冻存体系冻存的细胞经复苏后细胞活率不高的技术问题。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种细胞冻存液，包括：以下组分：

二甲基亚砜、人血白蛋白、低分子右旋糖苷、人间充质干细胞外泌体、羟乙基淀粉和基础培养基。

优选地，按体积分数计，二甲基亚砜30体积份、人血白蛋白10～20体积份、低分子右旋糖苷10～20体积份、人间充质干细胞外泌20体积份和羟乙基淀粉10～20体积份、余量为基础培养基。

更优选地，二甲基亚砜30体积份、人血白蛋白15体积份、低分子右旋糖苷15体积份、人间充质干细胞外泌20体积份体和羟乙基淀粉10体积份。

优选地，所述基础培养基选自RPMI 1640基础培养基、Gibco的DMEM高糖基础培养基、DMEM基础培养基、DMEM/F12基础培养基或a-MEM基础培养。

优选地，所述基础培养基为RPMI 1640基础培养基。

人血白蛋白可直接市购，本发明实施例使用的人血白蛋白购买于广州医药公司，品牌为：杰特贝林，进口药品注册号：S20120070。

1640基础培养基、二甲基亚砜、低分子右旋糖苷和羟乙基淀粉均为市购。

人间充质干细胞外泌体来源于广东华夏健康生命科学有限公司人类干细胞库里的脐带间充质干细胞，经过培养扩增后，收取条件培养基，高速离心后获取人间充质干细胞外泌体。

本发明采用了人血清白蛋白、羟乙基淀粉、低分子右旋糖苷和人间充质干细胞外泌体代替动物血清，既提供了类似动物血清的营养成分，还提供了适合细胞保存的微环境，使得细胞在复苏后可直接回输至人体。且不添加动物来源的血清，避免了动物来源的病毒污染。

人血白蛋白和羟乙基淀粉等大分子物质能在细胞表面形成水化膜，避免冰晶的形成，降低了对细胞的机械损伤，避免了温度下降或上升而造成细胞的损伤死亡。