[发明专利]一种从海葡萄中提取硫酸半乳聚糖的方法

权利要求书

1.一种从海葡萄中提取硫酸半乳聚糖的方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：

（1）前处理：取新鲜海葡萄洗净后晒干磨粉，得到海葡萄干粉；

（2）脱脂：将步骤（1）中得到的海葡萄干粉采用有机溶剂抽提，得到脱脂海葡萄干粉；

（3）硫酸半乳聚糖提取：向步骤（2）中得到的脱脂海葡萄干粉中加入蒸馏水，匀浆后升温搅拌提取一定时间后，离心过滤后浓缩得到含硫酸半乳聚糖的浓缩液；

（4）除蛋白：向含硫酸半乳聚糖的浓缩液中加入脱蛋白试剂，脱蛋白后得到硫酸半乳聚糖粗产品水溶液，再向其中加入活性炭，吸附其中的色素，得到无色透明的硫酸半乳聚糖粗产品水溶液；

（5）透析除盐：将步骤（4）中得到的无色透明的硫酸半乳聚糖粗产品水溶液倒入透析袋中进行透析，然后冷冻干燥，得硫酸半乳聚糖粗产品；

（6）精制：将半乳聚糖粗产品经过离子交换柱层析后得到硫酸半乳聚糖；

所述的步骤（1）中海葡萄干粉的粒度为40~300目；

所述的步骤（3）中蒸馏水与海葡萄干粉的质量比为10~15:1，提取温度为60~100℃，提取时间3~5小时，重复提取3 次；

所述的步骤（3）中含硫酸半乳聚糖的滤液浓缩后的体积为原滤液体积的5~10%；

所述的步骤（4）中脱蛋白试剂为Sevage试剂，所述的脱蛋白步骤如下：向含硫酸半乳聚糖的浓缩液中加入浓缩液体积0.5~3倍的Sevage试剂，充分震荡30~45分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并，并重复1~3次、

所述的步骤（5）中透析袋的截留分子量为2500~5500；

所述的离子交换柱为强阴离子交换柱Q Sepharose^TMFast Flow（QFF），具体操作如下：准确称取50mg样品溶于1mL的去离子水中，完全溶解后将样品溶液，用0.45μm微滤膜滤过后进行上样，洗脱液为事先配好的0-2mol的NaCl溶液，从低浓度向高浓度进行分梯度洗脱，期间使用部分收集器收集洗脱液，洗脱的流速设定为3mL/min，各个梯度收积约2倍柱体积的洗脱液，期间使用硫酸-苯酚法跟踪检测，将分光光度计设定在490nm处，并测量每管吸光值大小，按照每管所测得的吸光值绘制洗脱曲线，然后选取收集最大的水洗洗脱峰，经过旋转蒸发仪减压浓缩，最后冷冻干燥，得到硫酸半乳聚糖；

所得硫酸半乳聚糖中，各单糖的摩尔比为Man(甘露糖):Glc（葡萄糖）:Gal（半乳糖）:Xyl（木糖）=3.4 :0.2 :3.3 :1.4；

硫酸半乳聚糖的分子量为1880kDa；

硫酸半乳聚糖中硫酸根的质量含量为20%。

2.根据权利要求1所述的一种从海葡萄中提取硫酸半乳聚糖的方法，其特征在于，所述的步骤（2）中有机溶剂为无水乙醇、乙醚、异丙醇、正己烷或者丙酮中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种从海葡萄中提取硫酸半乳聚糖的方法，其特征在于，所述的步骤（4）中活性炭的添加量为硫酸半乳聚糖粗产品水溶液质量的1~5%，吸附时间为60~120分钟。