[发明专利]一种卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法

说明书

本发明涉及一种卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法，属于生物应用技术领域。该方法包括卷烟烟气抽吸、烟气稀释、参考孔和检测孔设置、小鼠暴露、采样、检测孔数据标准化、时间变异系数计算、空间变异系数计算、判定等步骤。本发明的方法操作简单，对卷烟烟气在暴露周期内浓度以时间和空间两个方面作为切入点，建立卷烟烟气口鼻暴露系统的相关参数，验证烟气口鼻暴露体系中烟气颗粒物的浓度及其粒径分布特征的均一性和稳定性，为后续生物学效应的科学性和准确性提供保证。

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，具体涉及一种卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法。

背景技术

卷烟烟气是一种含有颗粒物、挥发性有机物和气体的混合物。在利用动物模型研究其生物学效应的暴露方法中，口鼻暴露系统和全身暴露系统是烟气生物学效应研究的两种主要方式，其中口鼻暴露方式与全身暴露相比，避免了动物毛发对暴露气溶胶的吸附和过滤，同时还可以迅速使暴露仓内的气溶胶分布均匀并节省样品等优点，是卷烟烟气啮齿类动物急性、亚急性和亚慢性吸入暴露的主要方式。

现有烟气啮齿类动物吸入暴露的大多数研究中注重生物学效应指标结果，忽略了对小鼠口鼻暴露方法自身的研究。口鼻暴露方法中，不同时间和位置的动物是否能够吸入暴露特征相同或稳定的烟气决定相应生物学效应的均一性、可重复性和准确性。

目前针对小鼠口鼻暴露方法的研究少之又少，且完全忽视了烟气颗粒物的浓度及其粒径分布特征等暴露特征为指标的数据，而上述数据对于烟气的生物学效应研究来说至关重要，因为在动物暴露过程中烟气颗粒物的浓度及其粒径分布特征直接决定着烟气在动物肺中的沉积剂量和部位，也决定着机体对烟气中成分产生相关生物学效应和代谢途径。

因此如何克服现有技术的不足，研究出一种可确保烟气暴露动物生物学效应结果的准确性和可重复性的卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法是目前生物应用技术领域亟需解决的问题，目前未有相关研究。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明以卷烟烟气颗粒物浓度及粒径分布特征为指标进行监测，在暴露周期内浓度以时间和空间两个方面作为切入点，旨在提供一种可确保烟气暴露动物生物学效应结果的准确性和可重复性的卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种卷烟烟气小鼠口鼻暴露方法，包括如下步骤：

步骤（1），卷烟烟气抽吸：

每支烟抽吸持续时间2-5s，抽吸频率30-60s，抽吸容量35.0-50ml/2s，抽吸口数4-6口，得到卷烟烟气；

步骤（2），烟气稀释：

将步骤（1）得到的卷烟烟气与洁净空气按体积比为1:10-1:100的配比稀释混匀，后进入口鼻式暴露系统；

所述的洁净空气是空气经高效空气过滤器过滤所得；

步骤（3），参考孔和检测孔设置：

在口鼻式暴露系统上，选择一个采样孔作为参考孔，同时，随机选择多个采样孔作为检测孔；

步骤（4），小鼠暴露：

将小鼠束缚在固定筒中适应15-30min后，将装有小鼠的固定筒安装在口鼻式暴露系统上除了采样孔的其余孔对应的位置上，内缸正压烟气气流进入动物鼻部，呼出气流从侧面被吸入外缸，平衡至少10min后进行采样；

步骤（5），采样：

通过步骤（3）选择好的参考孔和检测孔进行采样，之后测量所采样品的烟气颗粒物的浓度和粒径中值；连续多天进行采样测量，每天采样测量多次；

步骤（6），检测孔数据标准化：