[发明专利]利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法

说明书

本发明公开了一种利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，包括如下步骤：1)将中空纤维反应器灭菌处理；2)分离单细胞；3)将分离的单细胞植入中空纤维反应器内，封口，将中空纤维反应器放入培养皿中，并加入培养基，培养1～20天后，取单核细胞进行活性测试。本发明提供一种利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其具有细胞培养时间短，细胞存活率高，细胞保存时间久的优点；中空纤维反应器包括多根平行排列的中空纤维管或者为多根中空纤维管组成的纤维束，每个中空纤维管表面均设有多个孔洞，有利于细胞培养时养分传送，提高细胞成活率和生长速度。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法。

背景技术

目前进行细胞体外初代培养的方式是利用培养皿进行体外培养，培养皿属于平面培养而且细胞在在液体中的漂浮过程不易和彼此接触，导致体外初代培养成功率非常低。

发明内容

针对上述现有的细胞体外初代培养成功率低的问题，本发明提供一种利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，包括如下步骤：

1)采用醋酸电浆将中空纤维反应器表面改质10～30min，灭菌处理5～ 10min；

2)分离单细胞；

3)将分离的单细胞植入中空纤维反应器内，封口，将中空纤维反应器放入培养皿中，并加入培养基，培养1～20天后，取单细胞进行活性测试。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述单细胞选自单核细胞或肿瘤细胞。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述单核细胞的分离具体为：采用聚蔗糖密度梯度离心法从全血分离；所述肿瘤细胞的分离具体为：采用酵素将肿瘤样本分解成肿瘤细胞。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述中空纤维反应器包括多根平行排列的中空纤维管。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述中空纤维反应器包括由多根中空纤维管组成的纤维束。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述中空纤维管的直径为70～100μm，壁厚为2～4μm，长度为3～5cm。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，每个所述中空纤维管表面均设有多个孔洞，所述孔洞的直径为100～ 300nm。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述培养基为RPMI-1640。

优选的是，所述的利用中空纤维反应器进行单细胞体外初代培养的方法，其中，所述活性测试具体为：

1)将中空纤维反应器浸泡于2ml的第一移液器中，第一移液器中含有200μ l0.5％噻唑蓝溶液和1000μl磷酸盐缓冲溶液，中空纤维反应器避光保存30min，离心分离出单细胞；

2)将中空纤维反应器置于含有500μl二甲基亚砜的2ml第二移液器，避光保存24h；

3)取经步骤2)处理的细胞溶液100μl至于96孔盘，测定570nm吸光度值，以判断细胞培养的存活率。

有益效果：