[发明专利]一种快速检测遗传性皮肤糖基化能力基因的方法

说明书

本发明为一种快速检测遗传性皮肤糖基化能力基因的方法，涉及分子生物学领域。本发明涉及检测一个基因的两个SNP位点，提供待检测位点的检测用特异性引物及其反应条件(详见表1～3)。本发明采用高分辨率熔解曲线分析技术(High Resolution Melting，HRM)以分析待检测样本的各SNP位点基因型。为辅助分析待检测样品的基因型，本发明还将提供各SNP位点对应标准基因型模板(含野生型、突变杂合型及突变型)。

技术领域

本发明为一种快速检测皮肤抗糖基化能力基因的方法，涉及分子生物学领 域，尤其针对美肤行业肤质评测。

背景技术

目前，常用的基因检测方法为测序法、基因芯片法、飞行质谱法，这些方 法都需要在完成PCR扩增后进行后续实验分析，实验周期相对较长，适用于中、 高通量的SNP检测。使用支持高分辨率熔解曲线分析技术 (High Resolution Melting，HRM)的仪器仅需要一次PCR扩增后即可根据 扩增产物直接进行分析报告得出样品的基因型，极大的缩短了实验时长。

HRM是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分 析新技术，具有极高的敏感性，可以检测出单个碱基的差异，并且成本低、通 量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限，实现了真正的闭管操作。

HRM无需使用序列特异性探针，而是利用一种饱和染料对PCR反应产物 进行分析。基本原理：双链核苷酸(double strand DNA，dsDNA)的热稳定性受 其长度和碱基组成的影响，序列变化会导致升温过程中dsDNA解链行为的改 变。因为所用的荧光染料只能嵌入并结合到dsDNA上，因此利用实时PCR技 术，通过实时检测dsDNA熔解过程中荧光信号值的变化，就能以生成不同形 状熔解曲线的方式将PCR产物中存在的差异直观地展示出来。同时，借助于专 业性的分析软件就可以对测试群体实现基于不同形状熔解曲线的基因分型或归类。

所谓糖基化即体内的葡萄糖分子或其他糖类分子错误地粘贴到蛋白质上， 引起蛋白质变性，这一有害反应与氧化反应一样对衰老起着推动作用，丙二醛 和甲醛也常参与糖基化反应。糖类分子一旦粘贴到蛋白质上，就会引起一些组 织褐色退变，在皮肤部位产生老年斑。胶原蛋白与细胞外液的葡萄糖发生糖化 反应形成糖基化终产物(advancedglycation end products，AGEs)，且随着年龄 的增长而累积，使养料及废物的扩散性能减弱，组织延展性和硬度增加，降低 了胶原的可溶性而难以被胶原酶水解造成皮肤弹性下降，皱纹产生，由于AGEs 生成的不可逆性导致皱纹不断加深并且不易被平复。弹性蛋白与细胞外液的葡 萄糖发生糖化反应形成AGEs，导致弹性纤维发生变性交联，弹性消退，皮肤变 薄，含水量减少，皮肤进一步萎缩，变薄。

糖基化是一种人体内的糖分和蛋白质相结合的现象。葡萄糖是人体重要的 细胞燃料，但如果身体不能完全代谢，可能会发生糖化。当体内多余的葡萄糖 分子连接到皮肤的胶原蛋白和弹性纤维时，蛋白质发生质变从而失去原有的功 能。大量研究表明，糖基化程度与皮肤老化有着密切的关系，会导致皮肤松弛， 破裂和变薄等。

AGER(advanced glycosylation end products)定位于6号染色体p21.32，其 编码表达的蛋白为一种新的模式识别受体-晚期糖基化终产物(advanced glycationendproducts，AGEs)，广泛参与众多疾病的病理过程，如阿尔兹海默症、 肺炎、肿瘤和糖尿病等。AGEs是由正常机体中游离的葡糖糖、半乳糖等营养物 质在非酶糖基化作用(Non-encymatic glycation)下产生的，随着年龄的增长含 量不断升高，被认为是机体衰老的标志之一。该基因在其启动子区域存在两个 SNP位点(rs1800624、rs1800625)，这两个位点的突变都使其基因表达上调， 导致细胞内糖基化作用加强，机体衰老加速。

发明内容