[发明专利]一种创制玉米甜糯籽粒种质的方法

权利要求书

1.一种构建甜糯玉米种质的方法，包括：

1）定点突变受体玉米中的Sh2基因和Wx基因，筛选得到所述Sh2基因和所述Wx基因均发生突变的双纯合突变玉米；

2）定点突变所述受体玉米中的所述Wx基因，筛选得到Wx基因发生突变的Wx基因单突变玉米；

3）将所述双纯合突变玉米与所述Wx基因单突变玉米杂交，得到杂交一代；将所述杂交一代自交，即得到与所述受体玉米相比甜度和糯性均增强的玉米籽粒；所述杂交一代即为甜糯玉米种质；

步骤1）中，所述双纯合突变玉米通过将名称为重组载体1的重组载体导入所述受体玉米中筛选所述Sh2基因和所述Wx基因均发生突变的玉米得到；所述重组载体1含有靶向名称为靶序列1的sgRNA的表达盒、靶向名称为靶序列2的sgRNA的表达盒和Cas9基因表达盒；所述靶序列1为序列表中序列1的第5785-5804位；所述靶序列2为序列表中序列2的第1909-1928位；

所述靶向名称为靶序列1的sgRNA的表达盒包括启动子和名称为Sh2-sgRNA的sgRNA的编码序列；所述启动子为U6-2启动子，所述Sh2-sgRNA的编码序列为序列表中序列3的第9132-9234位；

所述靶向名称为靶序列2的sgRNA的表达盒包括启动子和名称为Wx-sgRNA的sgRNA的编码序列；所述启动子为U6-2启动子，所述Wx-sgRNA的编码序列为序列表中序列3的第8418-8520位；

所述Cas9基因表达盒由启动子、Cas9编码序列和终止子组成；所述启动子为UBI启动子，所述Cas9编码序列为序列表中序列3的第2150-6415位，所述终止子为NOS终止子；

步骤2）中，所述Wx基因单突变玉米通过将所述重组载体1导入所述受体玉米中筛选所述Wx基因发生突变的玉米得到。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组载体1为含有序列表中序列3所示的DNA片段的重组载体。

3.下述X1）或X2）的产品：

X1）成套试剂，由权利要求1中所述靶向名称为靶序列1的sgRNA的表达盒、所述靶向名称为靶序列2的sgRNA的表达盒和所述Cas9表达盒组成；

X2）生物材料，为下述B1）至B3）中的任一种：

B1）序列表中序列3所示的DNA片段；

B2）含有B1）所述核酸分子的重组载体；

B3）含有B1）所述核酸分子的重组微生物、或含有B2）所述重组载体的重组微生物。

4.权利要求3所述产品在构建甜糯玉米种质中的应用。