[发明专利]检测阿尔茨海默症基因突变的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测阿尔茨海默症基因突变的引物组及试剂盒，设计了4组针对阿尔茨海默症相关基因不同位点的引物组，本发明所用质谱检测平台操作更加简便，并可以同时检测每份样本DNA的多个位点以及对检测结果进行实时监控和评价，且结果判定方式更加简单直观，同时具有操作简便，相对单个样品成本较低等诸多优势，同时多基因多位点分析，可以更准确的评估阿尔茨海默症的发病风险。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种检测阿尔茨海默症基因突变的引物组及试剂盒。

背景技术

阿尔茨海默症(Alzheimer disease，AD)是一种病因未明的起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上主要表现为记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆的特征。该病可能是一组异质性疾病，在多种因素(包括生物和心理因素)的作用下才发病。从目前研究来看，该病的可能因素和假说多达30余种，如家族史、头部外伤、教育水平较低、甲状腺病、母育龄过高或过低、病毒感染等。根据发病时间，可以分为早老性痴呆(65岁前发病者)和老年性痴呆(65岁后发病者)，且女性发病高于男性发病，女性发病约为男性发病的3倍。

由于该病起病缓慢或隐匿，病人及家人常说不清何时起病，不能及时的预防或减缓发病的时间。目前，检测AD的手段主要集中在神经心理学检验、血液检查、神经影像检查、脑电图、脑脊液检测，但这些检测手段的检测过程繁复、成本高，且只能在有发病征兆或发病初期检测出AD。

据目前研究结果显示，基因检测可以为AD诊断提供参考。目前，在国际上已经有四个AD致病基因和易感基因被确定以及认可，分别为蛋白前体蛋白(APP)基因、早老蛋白-1(PSEN1)基因、早老蛋白(PSEN2)-2基因和载脂蛋白E(APOE)基因。在家族性早发型AD中发现有50％的人群携带APP、PS1、PS2的突变，在晚发型AD病人中，携带APOE4基因的频率增多。基因检测可以从根源上预测AD的发病概率，从而做到早发现，早预防。

APP位于染色体21q21.1-21.3，14％的EOAD是由该基因的突变所引起的，研究发现rs1800557为EOAD的一个致病突变位点；PSEN1位于染色体14q24.3，PSEN2位于染色体1q31-Q42，它们编码的蛋白是γ－分泌酶复合体的重要组成部分。研究发现，约80％的家族性EOAD患者中携带PSEN1的突变，约5％的家族性EOAD患者检测到PSEN2发生突变。最近研究发现PSEN1rs17125721和PSEN2rs28936379突变是AD的致病因素；APOE4位于染色体19q13.2，编码的载脂蛋白E是脂蛋白代谢的调节因子，在中枢神经系统内与胆固醇转运、神经可塑性、炎症反应等有关。是目前认为与LOAD发病风险关联性最强的基因，rs429358是LOAD发病相关的一个位点。

近年来分子诊断技术发展迅速，基因测序手段日益发展，在AD基因诊断技术应用过程中，荧光定量PCR是当前比较常用的阿尔茨海默症基因检测方法，但其检测过程只能检测单个基因位点，单次检测样本量小，从而对阿尔茨海默症的诊断分析造成误差。因此，检测技术还是以质谱检测为主，该技术主要检测的是中国人群阿尔茨海默症的致病基因突变。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种检测阿尔茨海默症基因突变的引物组及试剂盒，在采用质谱检测方法检测人体DNA中的阿尔茨海默症相关致病基因是否突变时，具有可操作性强、灵敏度和准确度高、节省时间等优点。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测阿尔茨海默症基因突变的引物组，包括：

检测APP基因rs1800557位点的扩增引物和单碱基延伸引物，所述扩增引物又包括具有SEQ ID NO：1序列的上游引物和具有SEQ ID NO：2序列的下游引物，所述单碱基延伸引物具有SEQ ID NO：3的序列；