[发明专利]醛化红细胞中内毒素的去除方法与应用

说明书

本发明涉及一种醛化红细胞中内毒素的去除方法与应用，所述去除方法包括如下步骤：(1)按照3:1～6:1体积比的比例加入内毒素去除液与被内毒素污染的醛化红细胞，20～30℃搅拌15～20分钟，搅拌转速不能过快，搅拌完毕后于20～30℃下静置10～20小时；(2)继续于20～30℃下缓慢搅拌的同时缓慢加入1mol/L盐酸溶液，边调节边取样检测溶液pH值，调节pH至6.0～8.0；(3)采用离心或压滤的方式分离处理完毕的醛化红细胞，并收集上清，对上清样本进行鲎试剂检测，检测结果内毒素含量应小于0.25EU/ml，即为合格；(4)用生理盐水重悬细胞，清洗后离心分离，重复两次后即得去内毒素的醛化红细胞；(5)收集醛化人红细胞保存于酚盐水中，2～8℃保存。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体而言，涉及一种醛化红细胞中内毒素的去除方法与应用。

背景技术

抗人T细胞猪免疫球蛋白(商品名：艾特吉)是一种针对淋巴细胞及其功能的特异性生物性免疫抑制类多克隆抗体药物，这一产品系用人淋巴细胞免疫猪，取其血浆提取的特异性免疫球蛋白。1966年首次应用于一例肾移植病例，现广泛应用于器官移植的免疫排斥预防及治疗、骨髓移植的移植物抗宿主反应预防，以及再生障碍性贫血等病的治疗和重型再生障碍性贫血，其作用机制主要是补体介导T细胞的细胞溶解作用和诱导T细胞凋亡[Mohty M.Mechanisms of action of antithymocyte globulin:T-cell depletion andbeyond.[J].Leukemia,2007,21(7):1387-1394.]。自身免疫性溶血性贫血、原发性血小板减少性紫癜及其它免疫病也可使用。

武汉生物制品研究所于二十世纪七十年代开始进行抗人T细胞猪免疫球蛋白研制工作，于1983年获得生产文号。2017年武汉生物制品研究所免疫制剂室独立成立为武汉中生毓晋生物医药有限责任公司，其与武汉生物制品研究所一脉相承。经多年临床使用证明：该产品的质量符合检定标准，并已达到国外文献所载的标准；多例临床试用有明显的免疫抑制效果，副反应比国外同类产品低；主要效力检定中的花环抗体抑制效价亦超过了国外同类部分产品；生产工艺中采用猪为免疫动物，改进了吸收及提取工艺，有独特创新之处；该产品填补了我国的空白。武汉中生毓晋生物医药有限责任公司是目前我国抗人T细胞猪免疫球蛋白唯一的生产单位，拥有该产品完全自主的知识产权。

抗人T细胞猪免疫球蛋白自正式生产以来，历经20余年，为武汉生物制品研究所赢得了良好的社会效益和经济效益。武汉中生毓晋生物医药有限责任公司生产的抗人T细胞猪免疫球蛋白中采用醛化人红细胞对免疫猪血浆中的红细胞抗体进行吸收，目的是最大限度地去除产品中地抗人红细胞抗体，尽量减小使用者的红细胞溶血反应。由于国家对红细胞这类生物原料的管控，其来源较为紧张，且生物原料具有易污染的特性，因而对内毒素超标的醛化红细胞的处理和利用显得非常必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种用氢氧化钠处理内毒素超标的醛化人红细胞，以降低醛化人红细胞内毒素含量至进行鲎试剂检测内毒素含量应小于0.25EU/ml的方法。

本发明首先涉及一种适合工业化生产的去除醛化红细胞内毒素的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)按照3:1～6:1体积比的比例加入内毒素去除液与被内毒素污染的醛化红细胞，20～30℃搅拌15～20分钟，搅拌转速不能过快，搅拌完毕后于20～30℃下静置10～20小时；

(2)继续于20～30℃下缓慢搅拌的同时缓慢加入1mol/L盐酸溶液，边调节边取样检测溶液pH值，调节pH至6.0～8.0；

(3)采用离心或压滤的方式分离处理完毕的醛化红细胞，并收集上清，对上清样本进行鲎试剂检测，检测结果为内毒素含量应小于0.25EU/ml，即为合格；

(4)用生理盐水重悬细胞，清洗后离心分离，重复两次后即得去内毒素的醛化红细胞；

(5)收集醛化人红细胞保存于酚盐水中，2～8℃保存。