[发明专利]一种同时检测尿苷和麦角甾醇的方法及其用途

说明书

本发明属于中药材成分检测领域，具体涉及一种同时检测尿苷和麦角甾醇的方法及其用途。该方法包括：供试品溶液制备；混合对照品溶液制备；HPLC测定：将供试品溶液和混合对照品溶液进行高效液相色谱检测，供试品溶液进样量0.5‑2.5μL。该方法通过控制进样量克服了尿苷用有机溶剂提取分析时出现的峰塌陷、峰形不对称等问题，实现对尿苷和麦角甾醇的同时检测，同时该检测方法稳定、可靠，应用范围广。

技术领域

本发明属于中药材成分检测领域，具体涉及一种同时检测尿苷和麦角甾醇成分的方法。

背景技术

随着药用真菌的种类不断增加，我国已成为名副其实的食药用菌大国。食药用菌因含有多糖、多肽氨基酸、甾体、核苷、生物碱、三萜、矿物质、维生素等多种活性成分而具有重要的药用价值。迄今为止，食药用菌活性成分的研究主要集中于多糖、三萜、核苷和甾体类化合物的单一类成分研究，同时研究多类活性成分的报道还相对较少。目前，已有研究通过高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中的核苷和麦角甾醇，但其报道的样品制备方法繁琐复杂、影响因素较多，不利于实际推广和应用。文献《加压溶剂提取-高效液相色谱法测定天然和人工虫草中的麦角甾醇、核苷及其碱基》中同时能够检测到虫草中的麦角甾醇和尿苷，但以甲醇为提取溶剂，提取温度160℃，还需加压提取，总体提取的条件较苛刻。

暗褐网柄牛肝菌是一种具有药用开发价值的食用真菌，经常食用可增强机体免疫力、改善机体微循环，因此，其子实体中活性成分的研究对其日后的开发应用有着重要意义。现市售的暗褐网柄牛肝菌有人工、半人工与野生三种，不同生长环境和真菌对其质量影响较大，无法保证其用药的安全性和有效性。目前已有文献报道绒柄牛肝菌HPLC指纹图谱分析的方法，文献《绒柄牛肝菌有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析研究》中绒柄牛肝菌甲醇有效部位的RP-HPLC指纹图谱可检出11个相对稳定的色谱峰，但没有对峰进行成分归属。药用真菌中尿苷作为主要成分之一，在HPLC检测中因其极性较大，核苷类成分的峰较高较多且容易将尿苷峰包埋在其中，在同时检测小极性甾醇类成分和大极性核苷类成分时，对尿苷进行与其他核苷类成分的有效分离及检测难度大。目前尚未有暗褐网柄牛肝菌分析方法的相关报道，需建立能同时有效鉴别分离暗褐网柄牛肝菌的尿苷和麦角甾醇的方法，为暗褐网柄牛肝菌及其他食药用菌的成分分析提供参考。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测尿苷和麦角甾醇的方法，该方法通过控制进样量克服了尿苷用有机溶剂提取分析时出现的峰塌陷、峰形不对称等问题，实现了HPLC图谱中各成分峰有效分离。本发明的方法灵敏、快捷、应用范围广。

一方面，本发明提供一种同时检测尿苷和麦角甾醇的方法，包括步骤：

将供试品溶液和混合对照品溶液进行高效液相色谱检测，HPLC色谱条件为：采用Waters HSST3色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相为0.1％甲酸水(A)-甲醇(B)，梯度洗脱(0～5min，0％B；5～15min，0％→4％B；15～45min，4％→100％B；45～60min，100％B)，流速1mL/min，供试品溶液进样量0.5-2.5μL。

在一些实施方案中，所述供试品溶液进样量为0.5μL。

在另一些实施方案中，所述供试品溶液进样量为1μL。

在另一些实施方案中，所述供试品溶液进样量为2μL。

在另一些实施方案中，所述供试品溶液进样量为2.5μL。

在一些实施方案中，所述色谱柱柱温为30℃。

在一些实施方案中，所述高效液相色谱检测波长为250-270nm。

在一些实施方案中，所述高效液相色谱检测波长为260nm。

在一些实施方案中，本发明所述的同时检测核尿苷和麦角甾醇成分的方法，还包括步骤：供试品溶液制备：往样品粉末中加入甲醇进行提取，过滤，取滤液即得。