[发明专利]基于碳量子点荧光猝灭法定量检测维生素B12

权利要求书

1.利用基于碳量子点荧光猝灭法定量检测维生素B₁₂的荧光探针检测维生素B₁₂的方法，其特征在于：具体步骤为：

（1）PNCQDs储备液的制备：0.5 g PNCQDs固体粉末中加入50 mL二次水，搅拌使其充分溶解得到浓度为10 mg/mL的PNCQDs储备液；

（2）维生素B₁₂储备液的制备：称取0.1402 g维生素B₁₂粉末，加入到20 mL生理盐水中，搅拌溶解，配制浓度为5.17 mmol/L的维生素B₁₂储备液；

（3）维生素B₁₂含量与PNCQDs荧光强度的线性方程的获得：将若干体积的维生素B₁₂储备液加入到浓度为2 mg/mL的PNCQDs溶液中，在365 nm激发波长下，记录PNCQDs在451 nm下的荧光强度值；通过Origin 软件线性拟合维生素B₁₂浓度与PNCQDs荧光强度，得到线性方程：F₀/F = 0.11956[VB₁₂] + 1.35303，R²= 0.994；式中F₀、F分别为维生素B₁₂加入前后PNCQDs的荧光强度；可检测的线性范围为1.99-31.01 µmol/L，最低检出限为0.785 µmol/L；

（4）待测样品的检测：将待测样品溶于生理盐水中，通过测量加入样品前后PNCQDs荧光强度的变化，代入线性方程即可得到样品中维生素B₁₂的含量；

（5）实际样品中维生素B₁₂的加标回收率的测定：向待测样品中加入PNCQDs储备液，使体系中PNCQDs浓度为0.2 mg/mL；VB₁₂储备液用生理盐水稀释至维生素B₁₂的浓度为2 mmol/L的VB₁₂标准溶液，然后将VB₁₂标准溶液加入体系中，测试实际样品中维生素B₁₂的加标回收率；

其中：基于碳量子点荧光猝灭法定量检测维生素B₁₂的荧光探针，以蔗糖作为碳源，乙二胺作为氮源，浓度为14.6 mol/L的浓磷酸作为磷源，通过酸碱中和放热碳化法制备PNCQDs，离心除去不溶物，透析去除未反应的前体物质和小分子，冷冻干燥得到荧光探针PNCQDs固体粉末；

所述荧光探针的具体制备方法如下：(1)前体物质的获得：称量0.4g蔗糖，向其中加6mL乙二胺和4 mL浓磷酸，通过酸碱中和放热碳化法得到深褐色黏稠物；（2）待反应体系温度冷却至室温后，将深褐色黏稠物溶解于二次水中，溶液8000转/分钟离心15分钟，上清液在500-1000 Da的透析袋中透析处理三天，透析袋中的溶液冷冻干燥，即得PNCQDs固体粉末。