[发明专利]一种低渗低电导率电穿孔缓冲液及其应用

说明书

本发明提供一种低渗低电导率电穿孔缓冲液，所述缓冲液每100ml含30mM NaCl。通过将Hela细胞消化，并重悬在缓冲液中，加入质粒混匀，进行电穿孔，将电击后细胞继续培养，行流式细胞术，即可分析EGFP阳性细胞比例。本发明所述低渗低电导率电穿孔缓冲液，因其低渗、低电导率的性质，可达到较高的电穿孔效率。本发明经比较转染效率，证明低渗低电导率缓冲液在用量相同情况下转染效率显著高于DMEM，而且在价格上明显低于市售商品。本发明所述低渗低电导率电穿孔缓冲液，配置简便，价格低廉，转染效率显著高于DMEM培养基，易于推广。

技术领域

本发明属于实验用缓冲液配方，涉及一种电穿孔缓冲液，尤其是涉及一种低渗低电导率电穿孔缓冲液及其应用。

背景技术

细胞转染是一种重要的技术手段，用于研究目的基因在细胞中的功能。电穿孔是一种重要的转染手段，可用于向细胞中转染DNA、RNA及药物等(Neumann,E.,1982)。目前的研究认为，电穿孔的原理为，外界电场的刺激赋予细胞膜足够的自由能，使细胞膜磷脂分子发生重排，导致细胞膜上疏水性孔洞的产生。随后，混合在电穿孔缓冲液中的外源DNA分子即可通过细胞膜孔洞进入到细胞内(Neumann,E.,1989)。由于商业化电穿孔缓冲液价格高昂，限制了电穿孔技术的大规模应用。因而，开发一个高效、廉价的电穿孔缓冲液十分必要。国内外部分实验室亦有采用DMEM等培养基作为电穿孔缓冲液(Shegogue,D.,2004)，但实际操作中发现其转染效率较低，限制了其应用。既往研究发现，转染成功的首要步骤是外源DNA和细胞膜的有效接触(Wolf,H.,1994；Golzio,M.,1998)。而低渗缓冲液可减少外源DNA与细胞膜之间的排斥(Nikolai Lebovka.,2008)。同时，在低渗条件下，细胞肿胀，细胞膜上磷脂分子间距大，在细胞膜孔洞形成后，孔洞不易于回封，也可增加外源DNA进入细胞的数量。因而，我们推测低渗电穿孔缓冲液可增加转染效率。另一方面，既往研究表明，电导率对转染效率有较大影响，降低电导率可增加电穿孔效率(Djuzenova,C.S.,1996)。因而，我们认为，采用低浓度的NaCl溶液作为电穿孔缓冲液，可达到低渗、低电导率的目的，增加电穿孔效率。

发明内容

本发明的目的是提供一种低渗低电导率电穿孔缓冲液，所述缓冲液每100ml含30mMNaCl。本发明所用缓冲液通过以下方法配制：取175.32mg NaCl溶于100ml纯水中，滤器过滤除菌，即得。

本发明的另一个目的是提供上述低渗低电导率电穿孔缓冲液在Hela细胞电转染中的应用。

本发明所述低渗低电导率缓冲液在使用时，以Hela细胞为例，将Hela细胞消化，并重悬在30mM NaCl电穿孔缓冲液中。随后，加入2ug pEGFP-C1质粒混匀，并将混合液置入电转杯中。使用BioRad公司电穿孔仪，采用BioRad公司预设Hela细胞电穿孔程序进行电穿孔，随后，将电击杯中细胞转移到培养板中，加入DMEM培养基继续培养。48小时后流式细胞术，分析EGFP阳性细胞比例。

本发明所述低渗低电导率电穿孔缓冲液，由于其低渗、低电导率的性质，可以达到较高的电穿孔效率。本发明经比较转染效率的试验证明，本申请的低渗低电导率缓冲液在用量相同情况下转染效率显著高于DMEM，而且在价格上明显低于市售商品，市售商品的价格是几千块一瓶，折合单次100元左右，而本申请的低渗低电导率缓冲液只要几分甚至几毛钱即可。本发明所述低渗低电导率电穿孔缓冲液，配置简便，价格低廉，转染效率显著高于DMEM培养基，易于推广。

附图说明

图1为本发明的电穿孔效果示例图。

图2为本发明缓冲液与DMEM组及商业化电穿孔缓冲液比较的转染效率图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1