[发明专利]一种利用拉曼光谱检测细胞培养基中葡萄糖含量的方法

说明书

本发明提供一种利用拉曼光谱检测细胞培养基中葡萄糖含量的方法，包括以下步骤：1)用葡萄糖配制浓度从0.1g/L至350g/L的系列标准葡萄糖溶液，置于拉曼光谱仪的比色皿中，设定激光投射距离为1～2mm，利用拉曼光谱仪采集光谱信号；2)以不同浓度标准葡萄糖溶液拉曼光谱的特征峰与浓度建立标准模型。本发明用拉曼光谱检测细胞培养基中葡萄糖的含量的方法，应用于兽医细胞培养基检测领域，不存在血红蛋白干扰因素；同时通过拉曼光谱距离和波长时间的调节，排除了干扰因素。相比于兽用生物制品领域现有葡萄糖溶液检测技术，本发明具有快速、简便、准确、灵敏的特点。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种用拉曼光谱检测葡萄糖含量的方法。

背景技术

目前在兽用生物制品领域，检测培养基等样品中葡萄糖含量的方法主要是利用血糖仪或者生化分析仪等仪器设备取样检测。葡萄糖是微生物生长中重要的碳源，但必须控制其浓度，培养基中有葡萄糖存在时，微生物利用乳糖的能力即受到抑制。所以培养基中葡萄糖含量需要实时的定量检测。但现有的葡萄糖检测方法，存在操作偏繁琐，耗费耗材多，耗时长等缺点。

拉曼光谱是一种散射光谱，基于光被分子散射的发生的频率变化来获得分子结构方面的信息。

专利CN201610994505.3公开了一种葡萄糖的检测方法，需要用银纳米材料和葡萄糖氧化酶构建检测体系，加入到样品中。申请号为CN201610450103.7的专利—基于表面增强拉曼散射和双分子探针的葡萄糖检测方法，所描述的葡萄糖检测方法需要对样品经过复杂的前处理。申请号为CN201310254285.7的专利提出一种利用SERS技术间接检测血清中葡萄糖含量的方法，所描述的葡萄糖检测方法需要进行复杂的样品前处理，向样品中加入显色底物等，不是无损的检测。专利《用于通过拉曼光谱进行无创伤性活体测量的设备》(申请号：201180005627.0)描述的是检测葡萄糖检测装置，对方法没有具体的描述。

虽然拉曼光谱检测已在多个领域中应用，但对于像细胞培养基这样成分复杂的对象，还不能实现对样品完全无损的定量检测。

发明内容

针对本技术领域存在的不足之处，本发明的目的是提出一种利用拉曼光谱检测细胞培养基中葡萄糖含量的方法。本发明检测细胞培养基中葡萄糖的含量，具有快速、简便、准确、灵敏的特点，不需要对样品进行前处理，对样品无损耗，同时避免了对实验试剂的耗费。

实现本发明上述目的技术方案为：

一种利用拉曼光谱检测细胞培养基中葡萄糖含量的方法，包括以下步骤：

1)用葡萄糖配制浓度从0.1g/L至350g/L的系列标准葡萄糖溶液，置于拉曼光谱仪的比色皿中，设定激光投射距离为1～2mm，利用拉曼光谱仪采集光谱信号；

2)以不同浓度标准葡萄糖溶液拉曼光谱的特征峰与浓度建立标准模型。

进一步地，用葡萄糖配制浓度从0.1g/L至320g/L的系列标准葡萄糖溶液，浓度梯度为0.4～10g/L。

本发明的优选技术方案为，所述拉曼光谱仪采集光谱信号的参数为：积分时间25000ms，平均次数3次，激光开关频率100。

其中，步骤2)所述的特征峰为扣除暗电流和背景后，强度为6.41×10⁴～0.21×10⁴的峰。

进一步地，选取拉曼位移293.5～1775、2780～2992cm-1处的峰为特征峰。

标准模型的制定可采用光谱仪配套的软件进行。其中，所述标准曲线的最低检出浓度为0.1g/L，最高检出浓度为350g/L。

所述的方法，还包括步骤：将培养基的样品置于拉曼光谱仪的比色皿中，采用和步骤1)相同的方法测定拉曼光谱，代入所述标准模型，获得所述培养基的样品中葡萄糖的含量。