[发明专利]MUT基因突变检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种MUT基因突变检测试剂盒，所述检测试剂盒包含：12对MUT基因特异性扩增引物、7条MUT基因特异性探针和1条MUT基因野生序列封阻探针；所述12对MUT基因特异性扩增引物的序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.24所示；所述7条MUT基因特异性探针的序列分别如SEQ ID NO.25‑SEQ ID NO.31所示；所述MUT基因野生序列封阻探针的序列如SEQ ID NO.32所示。该试剂盒能快速、准确、灵敏的检测MUT基因突变，并可将突变检测敏感度提高至0.01％。

技术领域

本发明涉及基因突变检测技术领域，具体涉及一种MUT基因突变检测试剂盒。

背景技术

甲基丙二酸血症(methylmalonic academia，MMA)是先天有机酸代谢异常中最常见的病种，主要是由于甲基丙二酰辅酶A变位酶(mutaseapoenzyme，mut)自身缺陷或其辅酶钴胺素(Cobalamin，Cbl，VitB12)代谢缺陷所致。变位酶缺陷包括完全缺陷mut0型，部分缺陷mut-型。钴胺素代谢缺陷包括cblA、cblB、cblC、cblD、cblE、cblF、cblG和cblH 8种亚型，其中cblC、cblD和cblF可导致辅酶脱氧腺苷钴胺素和甲基钴胺素合成障碍，引起体内甲基丙二酸、同型半胱氨酸等代谢物异常蓄积，故称为甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症(简称合并型MMA)。临床表现为神经、肝脏、肾脏、骨髓等多脏器损伤，以cblC型最为常见，其编码基因为MMACHC，定位于染色体1p34.1，属于常染色体隐性遗传病。

单纯甲基丙二酸血症中编码甲基丙二酰辅酶A变位酶的基因命名为MUT，定位于6p21，含13个外显子，总长35kb。至今已发现170余种突变，多为无义突变、错义突变和剪接位点的突变，缺失和插入突变较少，且大部分影响了MCM两个主要结构域，即C-端腺苷钴胺素结合区和N-端底物CoA结合区。

目前对于基因突变的检测方法主要有测序法和ARMS-PCR方法，但这两种方法都存在其中一定缺陷，其中，测序法灵敏度较低约20％，且操作复杂，检测时间较长，假阴性率较高。ARMS-PCR方法能够达到1％的灵敏度，但是检测成本过高，限制了其临床的推广和应用。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种MUT基因突变检测试剂盒。该试剂盒能快速、准确、灵敏的检测MUT基因突变，并可将突变检测敏感度提高至0.01％。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种MUT基因突变检测试剂盒，所述检测试剂盒包含：12对MUT基因特异性扩增引物、7条MUT基因特异性探针和1条MUT基因野生序列封阻探针；

所述12对MUT基因特异性扩增引物的序列分别如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.24所示；

所述7条MUT基因特异性探针的序列分别如SEQ ID NO.25-SEQ ID NO.31所示；

所述MUT基因野生序列封阻探针的序列如SEQ ID NO.32所示。

其中，12对MUT基因特异性扩增引物是用于选择性扩增MUT基因2、3、4、6、8、9、12这7个外显子上的突变序列，具体如下：

Ex2F1：5，-GGGCATCATCTAAACTATCTTC-3，；(SEQ ID NO.1)

Ex2R1：5，-TGAGTAGCTCCTATTTCCCAC-3，；(SEQ ID NO.2)

Ex2F2：5，-GAAGATATGCCCGTAGCTCCTA-3，；(SEQ ID NO.3)

Ex2R2：5，-GTAGCTCTCCCACATCATTAGC-3，；(SEQ ID NO.4)