[发明专利]一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种检测喹诺酮类药物的试纸条，所述试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。

2.一种根据权利要求1所述的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将所述滤样纸、所述免疫胶体金纸片、所述免疫硝酸纤维素膜、所述吸水纸依次粘贴在所述衬底上，制得所述试纸条。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金纸片的制备包括以下步骤：

制备免疫胶体金溶液；用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得所述免疫胶体金纸片。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金溶液的制备包括以下步骤：用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，获得OD₅₄₀值为1.9-2.1的免疫胶体金溶液，所述抗喹诺酮单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度为20-30μg/ml，所述胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述喷金缓冲液包括以下质量百分比的成分：8～12wt％1.0MTris液，0.2～0.3wt％NaOH，0.2～0.4wt％聚乙二醇30000，0.2～0.4wt％聚乙二醇6000，0.15～0.25wt％牛血清白蛋白，0.1～0.3wt％蔗糖，0.35～0.40wt％酪蛋白，以及0.02～0.08wt％海藻糖，余量为水，且所述喷金缓冲液的pH为8.0±0.05；

所述预处理液包括以下质量百分比的成分：0.3～0.4wt％PVP-30k，6～10wt％蛋白质、双糖以及多糖混合，余量为水，优选的，所述预处理液还包括或不包括蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽中的一种或几种。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述免疫硝酸纤维素膜的制备包括以下步骤：将0.3～0.5mg/ml喹诺酮-牛血清白蛋白复合物和0.4～0.6mg/ml羊抗兔IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得所述免疫硝酸纤维素膜。

7.一种快速检测喹诺酮类药物的试剂盒，包括盒体和检测卡，其特征在于，所述检测卡包括壳体和权利要求1-6任一项所述的试纸条。

8.一种利用权利要求7所述的试剂盒快速检测喹诺酮类药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

样品制备：称取样品适量，进行预处理；

标准品溶液制备：取喹诺酮标准品适量，二氯甲烷溶解；

待测液制备：向所述样品或标准品溶液中分别加入稀释液、提取液，充分振荡后离心，吸取离心后的上清液部分于试管中，吹干，再向吹干后的试管中加入复溶液，充分混匀；

检测：取所述待测液滴加入金标微孔中，分析检测结果。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述稀释液为乙腈，所述提取液为0.4％-0.6wt％的三氯乙酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸水溶液中的一种或几种，所述复溶液为0.8-1.2M的PBS缓冲液，所述样品、所述稀释液、所述提取液的体积比为5:3:2，所述复溶液与所述待测液的体积比为5:2，所述检测时的反应时间为3-5min。

10.一种根据权利要求7所述的试剂盒在检测中药材、中药饮片及食品中残留的喹诺酮类药物的应用。