[发明专利]一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法

说明书

本发明公开了一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法，其特征在于，包括血液预处理步骤和基因组DNA提取步骤。本发明的有益效果在于：本方法主要用于从人或哺乳动物血液中提取基因组DNA，抽提出的DNA可直接用于PCR、酶切等分子生物学相关实验。本发明的方法针对性强，操作方便简洁，通量高，且硅胶柱回收基因组DNA效率高、纯度高。

技术领域

本发明涉及基因提取领域，具体涉及一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法。

背景技术

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，在基因组DNA提取过程中应尽量避免使基因组DNA断裂和降解，以保障基因组DNA的完整性，为下面的研究打下基础。

现有技术的提取方法主要有物理法、化学法和生物酶法。玻璃珠法：是依赖于高频率的剧烈震荡破坏细胞膜释放核酸，对核酸的完整性损伤极大，不能有效的去除红细胞，洗脱液中含有血红蛋白，影响纯度和后期实验。磁珠法：操作步骤偏多，在批量操作过程中易污染，不能有效的去除红细胞，洗脱液中含有血红蛋白，杂质含量高，纯度低，对后期的实验有影响。煮沸法：高温条件下基因组DNA易降解，不能有效的去除红细胞，洗脱液中含有血红蛋白，杂质含量高于磁珠法，对后期的酶切、杂交PCR扩增抑制性强。化学法小批量单管提取：方法类似本发明可以有效的去除红细胞，得率和纯度高，但通量特别低，只适用于几个或几十个样本的操作。

发明内容

为了克服现有技术存在的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法，该方法针对性强，操作方便简洁，通量高；且硅胶柱回收基因组DNA效率高、纯度高。

为了实现本发明的上述方法，所采用的技术方案是：

一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法，包括如下步骤：

血液预处理步骤：

1)转移500uL～1000uL全血样品至2.2cm 96孔深孔板中，再用排枪加入700uL TRX溶液；

2)用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s；

3)震荡结束后称重配平，于板式离心机5000～6000RCF，2min，轻轻倒掉废液，吸水纸纸上倒扣放置30s(若沉淀仍显明显红色则需再进行步骤4、5，若无直接进行步骤6)；

4)再加入700uL TRX溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s；

5)于板式离心机5000～6000RCF，2min，轻轻倒掉废液，吸水纸上倒扣放置一会(若红细胞残留过多再重复一次步骤3)；

6)加入200uL 1x TE溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面再垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s，结束后于板式离心机中快甩至400RCF；

基因组DNA提取步骤：

1)加入200uL CCF溶液和20μl蛋白酶K(Proteinase K)，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧摇匀，55℃水浴锅中孵化10～40min；

2)加入300uL PR溶液和300uL BA溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧充分摇匀，注意不要倒置摇晃，于板式离心机5000～6000RCF，5min；

3)转移上清液，用1000uL排枪调650uL吸取上清溶液于96孔板式柱子中(柱子套在收集板上，加BA时溶液吸最底层溶液，不要吸到蓝绿色溶液)，于板式离心机中3500RCF，1min，弃废液；

4)用排枪加入500uL漂洗液，于板式离心机5000RCF，1min，弃废液；

5)重复步骤5；