[发明专利]靶向治疗血液病恶性肿瘤的研究方法在审
| 申请号： | 201811362951.8 | 申请日： | 2018-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN111197060A | 公开（公告）日： | 2020-05-26 |
| 发明（设计）人： | 王海鹰 | 申请（专利权）人： | 上海恒润达生生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201210 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 治疗 血液病 恶性肿瘤 研究 方法 | ||
1.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸序列；
优选地，所述核酸构建物为载体；
更优选地，所述核酸构建物为RV逆转录病毒骨架载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，以及权利要求4所述的多核苷酸序列。
2.一种逆转录病毒包装，所述逆转录病毒含有权利要求1所述的RV骨架载体，以及gag-pol载体和VSVG载体，通过磷酸钙转染法进行逆转录病毒包装。
3.一种细胞株PG13，所述感染权利要求2所包装好的逆转录病毒，形成PG13-CD19-CD28z产毒细胞株。CD19-CD28z该核苷酸序列选自：
在所述抗CD19单链抗体的编码序列前的所述信号肽的编码序列如SEQ ID NO:1第1-63位核苷酸序列所示；和/或
所述抗CD19单链抗体的轻链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第64-384位核苷酸序列所示；和/或
所述抗CD19单链抗体的重链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第430-789位核苷酸序列所示；和/或
所述人CD8α铰链区的编码序列如SEQ ID NO:1第790-930位核苷酸序列所示；和/或
所述人CD28跨膜区的编码序列如SEQ ID NO:1第931-1010位核苷酸序列所示；和/或
所述人CD28胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第1011-1134位核苷酸序列所示；和/或
所述人CD3ζ胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第1135-1467位核苷酸序列所示的核苷酸序列组成。
4.一种单克隆细胞株筛选方法，所述权利要求3制备好的PG13-CD19-CD28z产毒细胞株通过有限稀释法进行高表达CD19-CD28z CAR的单克隆细胞株筛选。
5.权利要求4筛选的CD19-CD28z逆转录病毒感染T细胞获得个性化的CD19CART细胞。
6.权利要求1所述的载体、权利要求2所述的逆转录病毒、权利要求3所述的产毒细胞株、权利要求4的单克隆筛选方法、和权利要求5制备的CART细胞用来治疗CD19介导的疾病的药物中的用途；
优选地，所述CD19介导的疾病包括白血病和淋巴瘤；
更优选地，所述CD19介导的疾病包括B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、多毛细胞白血病、和急性髓性白血病。
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