[发明专利]特异性识别Vimentin的核酸适配体及其应用

说明书

本发明公开了可识别Vimentin的核酸适配体及其应用，其序列如SEQ ID No.1所示。本发明的核酸适配体AptVim可特异性结合Vimentin，Kd值为70.9±12.3nM。于AptVim末端连接生物素或荧光分子后可替代传统Vimentin抗体，通常仅需一步便可完成细胞表达或组织表达Vimentin蛋白的检测，不仅所需反应条件更加简单，并且稳定性更高，成本更加低廉。另外，本发明的核酸适配体经合适的转染试剂导入肿瘤细胞后，可诱导肿瘤细胞发生凋亡。不仅可作为基础实验与临床癌症的EMT诊断试剂，也可诱导肿瘤细胞的凋亡用于肿瘤治疗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及特异性识别Vimentin的核酸适配体及其应用。

背景技术

波形蛋白(Vimentin，Vim)是一种主要表达于间充质细胞中和中胚层来源的细胞中的中间丝蛋白。Vimentin在进化上高度保守，参与多种生理学进程：维持细胞骨架形态，促进细胞黏附与迁移，调节细胞凋亡、信号转导、基因调节等。Vimentin是肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT)过程中的主要分泌蛋白，因此近年来成为了鉴定EMT发生的重要标志物。而大量研究表明Vimentin在多种上皮性恶性肿瘤中过度表达，通过参与EMT与多种复杂的信用通路，加速肿瘤生长，促进癌细胞的浸润与转移，对癌症的发展与形成起重要作用。DNA甲基化在基因水平下调肿瘤癌前病变相关Vimentin蛋白的表达，因此Vimentin甲基化程度也可作为胃癌、胰腺癌、结肠癌等多种癌症的诊断、分期与预后等指标。研究证实Vimentin的过表达可引起癌细胞能动性与侵袭性的增强，敲除其表达后这些特性减弱，揭示其具有临床治疗价值。Vimentin蛋白有望成为癌症临床预测的靶点，Vimentin蛋白的研究同时也对癌症治疗具有重要价值(Ko S H,Suh S H,Kim B J,et al.Expression of theintermediate filament vimentin in proliferating duct cells as a marker ofpancreatic precursor cells[J].Pancreas,2004,28(2):121-128；Satelli A,LiS.Vimentin in cancer and its potential as a molecular target for cancertherapy[J].CellularMolecular Life Sciences,2011,68(18):3033-3046；Fuyuhiro Y,Yashiro M,Noda S,et al.Clinical significance of vimentin-positive gastriccancer cells[J].Anticancer Research,2010,30(12):5239-43；Shirahata A,Sakata M,Sakuraba K,et al.Vimentin methylation as a marker for advanced colorectalcarcinoma.[J].Anticancer Research,2009,29(1):279-281)。

近年来发展的Vimentin单克隆抗体虽然具有较高的亲和性和特异性，但抗体本身所具有的一些缺陷，如高免疫原性、不稳定、化学修饰困难、批次间的差异性、生产方法有限及生产成本昂贵等，使其在基础研究和临床应用上受到一定的局限性。