[发明专利]一种杆菌肽高产菌株的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种杆菌肽高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待筛选的地衣芽孢杆菌菌株涂布在固体平板培养基上，待菌落形成后挑选接种于高通量种子培养基中培养；

(2)将步骤(1)中得到的培养液转接至发酵培养基中发酵；

(3)发酵结束后，将步骤(2)中得到的发酵液与三氯醋酸溶液混合静置沉淀后，离心取上清，并将上清与双缩脲试剂混合显色，立即用酶标仪测定显色液的OD₅₄₈，OD₅₄₈越高，菌株的杆菌肽生产能力越强；

(4)选取步骤(3)中得到的杆菌肽产量相对较高的菌株多株，进行复筛；步骤(1)所述培养、步骤(2)所述发酵、步骤(3)所述离心、步骤(3)所述显色、步骤(3)所述酶标仪检测均在高通量孔板上进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高通量孔板包含96深孔板、96浅孔板、48深孔板、24深孔板、12深孔板。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述加入三氯醋酸溶液的体积分数为10％-40％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述加入三氯醋酸溶液的体积与发酵液体积的比例为4:1-1:4。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述加入上清的体积与双缩脲试剂体积的比例为1:2-2:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中固体平板培养基上的培养条件是在35-40℃下培养20-24h。

7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中在种子培养基中的培养条件是600rpm、35-40℃培养20-24h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵，是将步骤(1)得到的培养液以10％的接入量接种至发酵培养基，在温度为35-40℃、转速为200-240rpm条件下，发酵48-60h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待筛选的地衣芽孢杆菌菌株，是将地衣芽孢杆菌进行诱变处理后得到的；所述诱变处理，包括物理诱变、化学诱变和代谢工程改造。

10.应用权利要求1-9任一所述的一种杆菌肽高产菌株的高通量筛选方法筛选得到的杆菌肽高产菌株。