[发明专利]一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合及其试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，用于扩增甲状腺髓样癌RET基因突变中的如SEQ ID NO.1所示的序列，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16的组合，本发明还公开了该引物组合的试剂盒及该引物组合的用途。本发明的引物组合，特异性强，准确覆盖目标区域片段，检测多种已知突变位点。本发明采用特异性引物和带有荧光边标记的混合溶液，对批量样本进行PCR扩增，再进行sanger测序分析，一次性可分析大量样本，同时对多个已知和未知突变进行检测，减少操作步骤，节省资源，提高效率。本发明试剂盒可广泛应用于临床甲状腺髓样瘤的辅助诊断检测，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合及其试剂盒及其用途。

背景技术

甲状腺髓样癌(MTC)是甲状腺恶性肿瘤之一，约占甲状腺癌的2％，MTC 包括遗传性MTC和散发性MTC，散发性MTC通常发生在四十到六十岁之间，临床表现不可预测，诊断时的年龄和疾病阶段与预后显著相关。遗传性MTC 主要为MEN2，MEN2有两种综合征MEN2A和MEN2B。MEN2A占MEN2 病例的95％，有四种变体：经典MEN2A(由统一存在的MTC和不太常见的嗜铬细胞癌(PHEO)或甲旁亢(HPTH)或两者出现)，MEN2A与皮肤苔藓淀粉样变(CLA)，MEN2A与先天性巨结肠病(HD)以及FMTC(具有MTC 但不是PHEO和HPTH的具有RET种系突变的家族或个体)。几乎所有 MEN2A，MEN2B，FMTC患者都携带RET胚系突变，约50％的散发性MTC 患者有RET突变，18％-80％缺乏体细胞RET突变的散发性MTC有HRAS， KRAS或极少NRAS的体细胞突变。散发性MTC中体细胞RET密码子M918T 突变似乎预示着进展的临床病程和不良预后。基于甲状腺髓样瘤RET，对于临床的应用指导有实际的意义，能够及时有效的筛查和区分高危人群，辅助疾病的诊断治疗以及预后。

目前针对甲状腺髓样瘤风险检测的同类服务项目较少，主要是针对甲状腺结节良恶性判断和分化型甲状腺癌的检测服务，我们依据临床指南中的明确要求，选择甲状腺髓样瘤相关的高风险的位点进行检测分析,弥补市场空白。甲状腺髓样瘤的基因检测包含PCR定量或NGS检测的方法。PCR定量每次可检测突变位点数量较少，同时进行多人多位点检测，工作量巨大；NGS检测价格高昂，检测周期长。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的之一在于提供一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合。

本发明的目的之二在于提供一种包含鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的试剂盒。

本发明的目的之三在于提供一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的用途。

为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16：

引物RET8的序列为：

F:TCCCTGTCCTTGGGCACTAGC

R:CTTGGGCGTTTCCAGGGCTTA

引物RET10的序列为：

F:GGGACACTGCCCTGGAAATAT

R:TGCTGTTGAGACCTCTGTGGG

引物RET11的序列为：

F:AGCCATGAGGCAGAGCATACG

R:TGGGGAGGGCAGGGGATCTTC