[发明专利]一种诱导矾根不定芽再生的方法

说明书

一种诱导矾根不定芽再生的方法，以矾根无菌苗的叶柄或叶片作为外植体，接种于诱导培养基上，进行诱导培养，获得矾根不定芽；其中，所述诱导培养基以MS为基本培养基，添加蔗糖2‑4wt.％，琼脂粉0.5‑0.7wt.％，萘乙酸0.05‑0.15mg/L，噻苯隆0.1‑0.2mg/L或6‑苄氨基嘌呤0.2‑1.0mg/L，pH5.5‑6.0；本发明简化了自诱导愈伤组织培养基转接至不定芽分化培养基的步骤，且有效解决了不定芽的玻璃化问题，操作简便，经济有效，能够为矾根种苗的快速繁殖、新品种的培育，以及利用基因工程手段进行矾根性状的改良提供技术支持。

技术领域

本发明属于植物的组织培养技术领域，具体涉及一种诱导矾根不定芽再生的方法。

背景技术

矾根(Heuchera spp.)系虎耳草科矾根属植物，是一种多年生常绿草本花卉，原产于美洲中部。因其花叶兼美，叶色亮丽且颜色丰富，是不可多得的新优彩叶观赏植物，可作为边饰、丛植、地被、盆栽等材料应用，在我国花卉市场上不断升温。

绝大部分矾根品种依靠无性繁殖方法进行种苗生产，分株繁殖和扦插繁殖因周期长、繁殖系数低、受季节影响大等不足，具有一定的局限性。

目前，组织培养技术是规模化繁育矾根种苗的主要方法。现有的矾根组培快繁技术均以芽作为起始扩繁的材料，存在材料取材困难、数量较少、对母株破坏性大等问题。

现有技术中，以矾根‘巴黎’叶柄作为起始扩繁材料，经过诱导培养和分化培养两个阶段，在诱导培养基上进行诱导培养，叶柄产生愈伤组织，再进一步转接至不定芽分化培养基上进行分化培养，获得不定芽。该方法中，其不定芽的分化率相对较低，且必需经过愈伤组织的转接过程，操作复杂、成本较高，且增加了无菌操作过程中的污染几率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导矾根不定芽再生的方法，简化了自诱导愈伤组织培养基转接至不定芽分化培养基的步骤，不定芽再生率在62.5％以上，可高达89.58％，该方法简便经济且有效，能够为矾根种苗的快速繁殖、新品种的培育，以及利用基因工程手段进行矾根性状的改良提供技术支持。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种诱导矾根不定芽再生的方法，包括以下步骤：

1)接种

以矾根无菌苗的叶柄或叶片作为外植体，接种至诱导培养基中；

2)诱导培养

将接种至诱导培养基中的外植体先暗培养14-28天，之后光照培养25-40天，获得矾根不定芽；

其中，培养温度为24±2℃，光照培养的光照时间为10-14h/d；

其中，所述诱导培养基以MS为基本培养基，添加蔗糖2-4wt.％，琼脂粉0.5-0.7wt.％，萘乙酸0.05-0.15mg/L，噻苯隆0.1-0.2mg/L或6-苄氨基嘌呤0.2-1.0mg/L，pH5.5-6.0。

进一步，步骤1)中，所述外植体为叶片时，将叶片剪成0.5～0.8cm×0.5～0.8cm的叶盘，进行接种。

又，步骤1)中，所述外植体为叶柄时，将叶柄的长度剪至0.8～1cm，接种于诱导培养基上。

优选地，步骤2)中，所述暗培养时间为21天，光照培养时间为30天。

又，步骤2)中，所述培养温度为25℃，光照培养的光照时间为12h/d。

进一步，所述外植体为叶柄时，所述诱导培养基中，6-苄氨基嘌呤0.2-0.5mg/L，pH5.8。

优选地，所述外植体为叶片时，所述诱导培养基中，6-苄氨基嘌呤0.5-1.0mg/L，pH5.8。