[发明专利]叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法

权利要求书

1.一种叶酸靶向水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法，其特征在于：将水飞蓟素制成固体脂质纳米粒并连接靶头叶酸，制成叶酸靶向的水飞蓟宾固体脂质纳米粒，

第一步、FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）的合成

合成步骤如下：①分别称取65.8mgFA（叶酸）、350mgH2N-PEG3350-NH2（二氨基-聚乙二醇3350）、30mgNHS（羟基琥珀酸酰亚胺）、60mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）溶解于1mLDMSO（二甲基亚砜）中，依次加入，加入100μLTEA（三乙胺），N2（氮气）保护、避光反应24h后50℃（500r·min-1）反应6h，加入45mL冷氯仿混匀，旋转蒸发去除氯仿，残留少许液体，真空干燥得淡黄色固体FA-PEG3350-NH2（氨基-叶酸-聚乙二醇3350），②50mgDSPE（脑磷脂）溶于2.5mLCHCl3（三氯甲烷），15mgSUC（琥珀酸酐）溶于0.5mlDMSO（二甲基亚砜），转入前一体系①中，逐渐加入50μLTEA（三乙胺），500r·min-1室温反应24h，残留少许液体，加入45mL无水冷丙酮沉淀，离心（12000r·min-1，10min），反复清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂），③将SUC-DSPE（琥珀酸脑磷脂）溶解在10mLCHCl3（三氯甲烷）中，加入30mgDCC（N，N′-二环己基碳二亚胺）室温反应4h活化羧基，称取200mgFA-PEG3350-NH2（氨基-叶酸-聚乙二醇3350）溶解在10mL的CHCl3（三氯甲烷）中后转入前一体系②中，加入40μLTEA，室温反应24h，冷丙酮沉淀并清洗产物，得产物FA-PEG3350-DSPE（叶酸-聚乙二醇3350-脑磷脂）；

第二步、叶酸修饰的水飞蓟素固体脂质体纳米粒制备

2.0%单硬脂酸甘油酯加入少量无水乙醇助融，10mg水飞蓟宾，水浴加热70℃熔融，作为油相，油相中加入3%膜材（溶于氯仿），称取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸馏水超声溶解，称取0.8%脑磷脂，加入少量无水乙醇超声溶解后加入泊洛沙姆188中，作为水相，将水相加热至同温度后以10ml·min-1的速度滴加至油相中，乳化10min后超声破碎（600w，8min,3s间隔），置于4℃水浴中固化，0.22μm滤膜过滤即得叶酸修饰水飞蓟宾固体脂质纳米粒（FA-SIL-SLN）。