[发明专利]一种核酸适体脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，以下式[1]、[2]、[3]、[4]、[5]的化合物，通过线粒体RNA适体与光不稳定互补寡核苷酸杂交；脂质体(DOPE+SM+NBD-DSPE)的合成及与适体的交联；复合物的后处理和纯化，制备得到光触发的核酸适体脂质体载药系统；

具体步骤如下：

(1)将式[1]、[2]化合物以物质的量之比1:1比例溶于氯仿/乙醇溶液中，该反应需要在RNase-free溶液中，且在冰上实现，得到RNA适体混合物；

(2)所用反应体系为DOPE、SM以及NBD-DSPE，其中DOPE、SM以及NBD-DOPE的物质的量之比为10： 3： 0.5，室温反应0.3～0.5小时；3’-AGAGGG//ACUCGA//AGUCC-5’中的//为光不稳定键为1-(2-硝基苯基)乙基键。

2.根据权利要求1所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤为：将DOPE，SM，NBD-DSPE按照物质的量之比溶于氯仿/乙醇溶液中，通过旋蒸仪蒸发氯仿/乙醇溶液在玻璃管底部形成脂质膜，将3-7％的RNA适体混合物添加到脂质混合物中，同时将pH为5.7的HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲液加入到脂质膜中，室温下孵育30分钟使脂质水合，之后使用浴式超声仪将脂质膜超声处理1～2分钟，在旋转蒸发器上真空蒸发有机相，30分钟后，加入500μL的去离子水，并将混合物在旋转蒸发器中保持真空30～50分钟，将形成为有机相的脂质颗粒(1mL)蒸发，在室温下通过100nm聚碳酸酯膜挤出10～20次。

3.根据权利要求1所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，交联方法为水合法。

4.根据权利要求1所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，所采用的缓冲体系为HEPES缓冲液，室温下孵育时间为30分钟。

5.根据权利要求1所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，载药部分(DOPE+SM+NBD-DSPE)为市面上的抗衰药物，所述抗衰药物为槲皮素、维生素E或氯酯醒。

6.根据权利要求5所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，聚合物和药物的摩尔比为1:3.2-1:3.5。

7.根据权利要求1所述核酸适体脂质体的制备方法，其特征在于，纯化步骤为将其溶于去离子水，透析并冷冻干燥，或者经过高速离心分离纯化。