[发明专利]一种新型海洋生物污染检测标记物在审
| 申请号： | 201811378815.8 | 申请日： | 2018-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN109913463A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 祁鹏志;郭宝英;董文强;任世太 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435;C12Q1/6876;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 吴秉中 |
| 地址： | 316000 浙江省舟山市普陀海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 热休克蛋白 检测标记 毛蚶 海洋生物污染 核苷酸序列编码 海洋污染 分子生物技术 基因克隆技术 核苷酸序列 生物学反应 体内靶细胞 氨基序列 毒性效应 反应终点 分子水平 特异性强 预警作用 基因 靶分子 灵敏 污染物 克隆 暴露 海洋 | ||
1.毛蚶热休克蛋白(90)基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的毛蚶热休克蛋白(90)基因，其特征在于：所述毛蚶热休克蛋白(90)基因通过基因克隆技术克隆获得，其包括如下步骤为：
1)总RNA提取；
2)以步骤1获得的总RNA样品作为模板，反转录合成cDNA第一链；
3)利用引物扩增基因核心片段；
4)利用RACE反应扩增获得毛蚶热休克蛋白(90)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，并进行生物信息学分析。
3.根据权利要求2所述的毛蚶热休克蛋白(90)基因，其特征在于：所述步骤3中引物的序列为：
M1-F：5'-CGTAGGTGCGGATATGTCCAT-3'，
M2-R：5'-GCTTGACAGCCAATTGGTCT-3'。
4.根据权利要求2所述的毛蚶热休克蛋白(90)基因，其特征在于：所述步骤4中RACE反应过程中获得的5’RACE序列如SEQ ID NO.4所示，3’RACE序列如SEQ ID NO.5所示。
5.毛蚶热休克蛋白(90)，其特征在于：由权利要求1-4任一项所述的毛蚶热休克蛋白(90)基因编码。
6.一种新型海洋生物污染检测标记物，其特征在于：权利要求5所述的毛蚶热休克蛋白(90)用作海洋污染的检测标记物。
7.根据权利要求6所述的一种新型海洋生物污染检测标记物，其特征在于：所述检测标记物监测海洋污染情况的方法为：选择毛蚶作为检测海洋污染的生物样本，通过对受到污染区域毛蚶的解刨提取肌肉和肝脏中的RNA，反转录成DNA，用荧光定量技术检测毛蚶热休克蛋白(90)基因在肌肉和肝脏中的相对表达量，检测海洋污染程度。
8.根据权利要求7所述的一种新型海洋生物污染检测标记物，其特征在于：所述荧光定量技术用引物为：
HSP90-F：5'-CGCAATGTTGAGTCGCTCGGC-3'，
HSP90-R：5'-GCCTAGTTGTCAAGTAGTCC-3'；
actin-real-F1：5'-TGCCATTCAGGCCGTATTGT-3'，
actin-real-R1：5'-CCGGCAAGATCCAACCTCAT-3'。
9.根据权利要求6或7或8所述的一种新型海洋生物污染检测标记物，其特征在于：所述毛蚶热休克蛋白(90)基因在肌肉和肝脏中的相对表达量的值越大，海洋污染程度越大，反之，相对表达量的值越小，海洋污染程度越小。
10.权利要求6或7或8或9所述的一种新型海洋生物污染检测标记物在海洋中壬基酚和/或铜和/或镉检测或监控中的应用。
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