[发明专利]一种脱细胞真皮基质材料的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞真皮基质材料的制备方法,包含如下步骤，其中各原辅材料的用量％除特殊说明外，均为被处理的称重断层皮片的重量百分数，即原辅材料重量＝被处理的断层皮片的重量×百分数：

(1)选取健康的猪、牛或羊：经屠宰剥皮后，修剪边缘，并去除多余浮肉，清洗后，用剖皮机将动物皮肤剖制成厚度为0.3～1.0mm的断层皮片，称重，然后对这些断层皮片在转鼓中依次进行以下工艺处理；

(2)使用脱脂剂进行化学脱脂；

(3)碱处理脱毛、病毒灭活；

(4)使用生化胰酶进行脱细胞处理；

(5)交联改性：设置转鼓温度35～40℃，加入pH＝10～11的缓冲液100％，交联剂GPE 1～20％，三乙醇胺1～2％，匀速转动10～120min；然后在交联液中加入甘氨酸0.1～1％，匀速转动20～60min，控干；

(6)后处理：使用纯化水冲100～300％闷洗10～30min2～3次，控干；设置转鼓温度30～32℃，加入纯化水100％，NH₄Cl 0.5～2％，平平加1～3％，匀速转动10～30min，至废液pH值为7.0～7.5控干废液；再使用纯化水100～300％闷洗10～30min2～3次，控干；设置转鼓温度32～36℃，加入纯化水100％，甘氨酸0.1～1％，匀速转动10～30min,控干废液，用纯化水100～300％闷洗10～30min 2～3次后重复添加甘氨酸1次；

(7)末道清洗，保湿，成型包装：设置转鼓温度35～40℃，使用注射用水100～300％闷洗2～15数次后流水冲洗10～60min，至取上清液滴加AgNO₃滴定液数滴无明显白色沉淀为止，控干；加入保湿剂1～20％，匀速转动30～60min，控干，分割规格后沥干水分或冷冻干燥，包装，制成脱细胞真皮基质材料，再经钴60所产生的γ射线辐照灭菌，即为成品。

2.根据权利要求1所述一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的动物皮为新鲜的、无重大疾病或传染病史的动物皮。

3.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所使用的转鼓为不锈钢恒温控速转鼓。

4.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述脱脂剂主要成分为十二烷基苯磺酸钠。

5.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于交联剂GPE是指丙三醇缩水甘油醚(662)。

6.根据权利要求1所述一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的化学脱脂具体工艺是：设置转鼓温度30～32℃，加入水150％，平平加1～3％，脱脂剂1～5％，匀速转动40～120min，控干废液；并使用水闷洗10～15min排尽废液2次，重复一次脱脂过程。

7.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，碱处理的工艺具体是：加入水300％，Na₂S 1～2％，NaOH 0.1～2％，匀速转动30～120min，控干废液，流水冲洗至废液pH值为8.0～9.0；设置转鼓温度30～32℃，加入纯化水100％，NH₄Cl 1～3％，平平加0.5～1.5％，匀速转动30～60min，至废液pH值为6.5～7.5控干废液；使用纯化水100～300％闷洗10～30min2～3次，控干。

8.根据权利要求1所述一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)使用生化胰酶进行脱细胞处理的工艺具体是：设置转鼓温度30～32℃，加入纯化水100％，生化胰酶0.05～0.1％，平平加0.3～0.6％，匀速转动30～60min，控干废液；再使用纯化水100～300％闷洗10～30min 2～3次，控干。

9.根据权利要求1所述一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中的pH＝10～11的缓冲液为：NaHCO₃-NaOH缓冲液、磷酸盐缓冲液，或者使用氢氧化钠、纯碱调节得到。