[发明专利]用于检测EGFR突变的组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，包含正向引物、反向引物和野生型EGFR基因结合分子，且所述正向引物和所述反向引物的组合能够得到包含EGFR突变位置的扩增产物，其中：

所述正向引物包括5’端区域、3’端区域以及位于所述5’端区域和所述3’端区域之间的中间区域，所述5’端区域包含第一侧序列、第二侧序列和环形区，且所述第一侧序列和第二侧序列能够进行第一互补，从而形成茎环结构，在所述5’端区域的第一末端具有荧光基团和第二末端具有淬灭基团，所述3’端区域的3’端最后一个碱基与待检测的突变碱基互补，所述中间区域设置为使所述5’端区域和所述3’端区域相对分开；

所述反向引物包括位于5’端的标签序列和能够与待检测的突变位置的下游的一部分序列完全互补的结合区域；和

所述野生型EGFR基因结合分子设置为能够特异性识别并结合至野生型EGFR基因的至少待测突变位置。

2.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述正向引物设置为其至少部分序列能够与所述扩增产物的部分序列进行第二互补，且第二互补区的Tm值大于第一互补区的Tm值。

3.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，从所述3’端区域的3’端起倒数第2-6个碱基位引入至少一个错配碱基。

4.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述中间区域的结构为(CH₂)m，其中m为5-20之间的自然数。

5.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述标签序列的长度为5-20nt，且所述标签序列与待检测的EGFR的序列不互补。

6.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述野生型EGFR基因结合分子由下式(1)的重复单元构成：

其中，n为6-20的整数，B为选自由A、T、G和C组成的组；且所述野生型EGFR基因结合分子与野生型EGFR基因结合的Tm为70℃以上；优选地，式(1)中n＝15，且沿从左到右的方向各重复单元中的B依次为CCGTGCAGCTCATCA。

7.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述正向引物的5’端区域长度为10-20nt。

8.根据权利要求1所述的用于检测EGFR突变的组合物，其特征在于，所述正向引物、所述反向引物和所述野生型EGFR基因结合分子分别以独立的状态存在，或者以两种以上成分的混合物形式存在。

9.一种用于检测EGFR突变的试剂盒，其特征在于，包含根据权利要求1-8任一项所述的组合物。

10.一种用于检测EGFR突变的方法，其特征在于，其包括使用根据权利要求1-8任一项所述的组合物，或使用根据权利要求9所述的试剂盒的步骤；优选地，所述方法为基于qPCR平台的方法。